Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Parte Introd 1_ - Coggle Diagram

- - - - Tiene conto sia della Carica degli ioni e della conc. delle specie dissociate
  - - - A parità di concentrazione hanno Effetti diversi:
        
        COSMOTROPI
        
        Stanno a SX
        
        Tendono PRIMA a STABILIZZANO e poi a far PRECIPITANO le proteine
        
        STANNO BENE IN ACQUA
        
        Strutturano l'acqua attorno a se
        
        Forte Interazione
        
        FENOMENO DI ESCLUSIONE PREFERENZIALE
        
        Favorisce la stabilità della proteina
        
        CAOTROPI
        
        Stanno a DX
        
        TENDONO a MANTENERE le proteine in soluzione a costo della loro struttura XCHè la denaturano
        
        NON è CHIARO perchè certi Anioni e Cationi sia a DX o SX
        
        Non c'è una teoria Unificante
    - - La proteina Minimizza l'area di superficie (proteina /solvente)
        
        Tenderà ad aggregarsi _ Precipitare
      - ESISTONO 2 modi per PRECIPITARE
        
        1_ STABILIZZATA
        
        Permette di RI- Sospenderla in H20
        
        2_ DENATURATA
        
        PRECIPITA = perdo la proteina
    - - alla capacità che hanno questi ioni di influenzare la molecola con cui viene a contatto
      - ES_ cellula con all'interno POTASSIO e all'esterno SODIO
        
        Questo perchè gli Ioni hanno EFFETTI diversi sull'H20
        
        Vicino all'interfaccia e lontano dall'interfaccia
        
        A seconda di dove agiscono : backbound, catena laterale carica e non carica )
    - - Parliamo di EFFETTI del sale ad > concentrazioni
      - Anche l'interazione ANIONE - CATIONE ha la sua importanza
        
        NON parliamo + di Soluto ma di Co Solvente
  - - - Troppo sale
      - Assenza di sale
    - - Ho una proteina che è un POLI Elettrolita
        
        con Molecole cariche che possono attirarsi
        
        quindi Interagire da un punto di vista Elettrostatico e aggregarsi = precipitare
    - - Devo indebolire le forze Elettrostatiche
    - - Le CARICHE OPPOSTE del SALE (risp prot) RIDUCONO e Neutralizzano le cariche
      - > Costante Di Elettrica del Mezzo
      - Forza di Columbus
        
        Formula della FORZA ATTRATTIVA tra 2 cariche
        
        è PROPORZIONALE al PRODOTTO delle cariche
        
        è INVERSAMENTE proporzionale al QUADRATO della DISTANZA
        
        K = 1/4 Pigreco Epsilon
        
        Epsilon = Costante dielettrica del mezzo
    - - > FORZA IONICA
        
        < FORZA ELETTROSTATICA
      - > COSTANTE DIELETTRICA
- - - - Abbiamo un supporto solido che è inerte
      - Interagisce con la FASE STAZIONARIA
      - Lavaggio
      - Fase di Mobile l' Eluente, trascina ciò che ha interagito con la resina
  - - - Liquida-Liquida
        
        Adatta per le Proteine
      - Solido Liquida
        
        Usata per i pigmenti
        
        non viene usata per le proteine in quanto queste non interagiscono con il supporto solido
- - - - LIBERE DI SCORRERE
      - Interagiscono con la Fase Stazionaria
  - - - Conc. di Specie nella Fase Stazionaria
      - Conc. di Specie nella Fase Mobile
    - - K= costante di ripartizione ( cost termodinamica)
        
        > K= > interazione con la fase stazionaria
        
        Può essere :
        
        Diversa = abbiamo la separazione
        
        Stessa = I due composti co- eluiscono insieme ( è inutile usare la stessa colonna)
        
        Bassa = non avviene la separazione ( non c'è interazione con la fase stazionaria)
- - - - Vengono sfruttate le 4 proprietà delle proteine
        
        Dimensione
        
        Carica
        
        Affinità
        
        Idrofobicità
- - - - SALI
        
        MOLECOLE che stabilizzano
        
        IONI (coenzimi, Potenziali Redox)
    - - Abbiamo la miscela di proteine
        
        Introduciamo il DALI
        
        ASSORBANZA = 400nm
        
        Emissione = Lunghezza d'onda >
      - Tecnica che si basa sulla Fluorescenza
      - AVREMO una fluorescenza
        
        BASSA quando è in soluzione
        
        Dovuto al Quecing tra le molecole
        
        quindi viene Dis- Eccitata dovuta agli urti tra le molecole
        
        ALTA
        
        quando il DALI è nella cellula
      - Esperimento consiste
        
        piastra 96 pozzetti con 96 condizioni differenti
        
        > della temperatura
        
        Esposizione dei siti Idrofobici
        
        Proteina si denatura
        
        Lettura della fluorescenza
        
        ottengo una Curva che >
        
        TM = > è la condizione migliore dove la proteina è più stabile
    - - Uso un KIT che contiene le sostanze le più comuni che stabilizzano la proteina