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反轉錄聚合酶鏈鎖反應(RT-PCR) (PCR技術應用 (犯罪鑑識, 醫學診斷, 親子鑑定, 分子生物學研究), RT-PCR的應用 (基因診斷,…
反轉錄聚合酶鏈鎖反應(RT-PCR)
PCR技術應用
犯罪鑑識
醫學診斷
親子鑑定
分子生物學研究
RT-PCR的應用
基因診斷
傳染病檢測
病毒分型
微生物檢測
PCR技術主要步驟
1.分離目標DNA的兩股
將目標DNA加熱至94度，使其兩股彼此分開
2.黏合引子對
將溫度降至55度，使特定序列的引子能與單股DNA上的簡基配對黏合。
3.目標DNA複製
加熱至72度，使DNA聚合酶由引子處開始複製DNA。每一次複製反應結束，目標DNA的數量會增加。
引子
人工合成的單股DNA，能引導DNA聚合酶以啟動目標DNA複製
因為兩股DNA複製起點之方向與序列都不同，所以需要兩種引子分別黏合在DNA的兩股上。
將一個DNA連續複製30次，則原先的DNA可增加30倍之多(DNA數目=2的N次方)
簡稱RT-PCR或qPCR
DNA擴增反應中，加入特定螢光染劑，推算聚合酶鏈鎖反應後的產物總量
快篩試劑
優點
快速(10到30分鐘)
操作方便(肉眼即可判讀)
最普遍篩檢工具
原理
用已知抗體偵測未知病毒的表面抗原，在以免疫沉澱方式呈色