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TESTE DE EFICÁCIA ANTIMICROBIANA (PROCEDIMENTO (Inocular cada embalagem…
TESTE DE EFICÁCIA ANTIMICROBIANA
Assegura a eficácia de conservantes antimicrobianos adicionados aos produtos farmacêuticos.
CONSERVANTES
Substâncias adicionadas em formas farmacêuticas não estéreis com a finalidade de protegê-las de quaisquer crescimentos microbianos.
Nas formas farmacêuticas estéreis são adicionados para inibir o crescimento de micro-organismos contaminantes durante o uso repetido das doses individuais quando acondicionadas em embalagens de doses múltiplas.
A quantidade de conservante utilizada em uma formulação deverá ser a mínima necessária para a proteção do produto sem prejudicar o paciente ou consumidor.
Precisa ser demonstrada para produtos tópicos múltipla-dose, produtos orais, oftálmicos, otológicos, nasais, fluidos de diálise, irrigação, etc.
O teste e os critérios estabelecidos se aplicam ao produto na forma como é encontrado no mercado.
MICRO-ORGANISMOS UTILIZADOS
Escherichia coli ATCC 8739
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Aspergillus brasiliensis ATCC 16404
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Candida albicans ATCC 10231
Os micro-organismos utilizados no teste devem ter, no máximo, cinco passagens contadas a partir da
cultura ATCC original.
Culturas mantidas por técnicas de congelamento, cada ciclo de congelamento,
descongelamento e reativação é considerado uma passagem.
Recuperar o material em meio de cultura líquido ou sólido.
Em meio de cultura líquido, após a incubação, centrifugar e descartar o sobrenadante. Suspender o sedimento com uma diluição 1/20 do meio de cultura de manutenção estéril e acrescentar um volume igual de solução de glicerol estéril 20% v/v em água.
Em meio de cultura sólido, transferir o crescimento da
superfície para o meio de cultura de manutenção líquido estéril, acrescido de 10% de glicerol estéril.
MEIOS DE CULTURA UTILIZADOS
Todos os meios de cultura utilizados no teste devem ser testados quanto à capacidade de crescimento.
PREPARAÇÃO DO INÓCULO
A partir da cultura estoque, inocular a superfície do meio de cultura sólido.
Para recolher o crescimento de bactérias e leveduras, utilizar solução salina estéril. Coletar a suspensão obtida em um tubo ou frasco estéril apropriado e acrescentar quantidade suficiente de solução salina estéril para obter uma concentração de 1x10^8 UFC/mL.
Para recolher o crescimento de
A. ninger
, utilizar solução salina estéril contendo 0,05% de polissorbato 80. Coletar a suspensão obtida em um tubo ou frasco estéril apropriado e acrescentar quantidade suficiente de solução salina estéril para obter uma concentração de 1 x 10^8 UFC/mL.
A cultura estoque pode ser incubada em meio líquido, e posteriormente centrifugadas. Descartar o sobrenadante e suspender o sedimento com quantidade suficiente de solução salina estéril para obter uma concentração de 1x10^8 UFC/mL.
Refrigerar as suspensões se não as utilizar em um período de duas horas.
Determinar o número de UFC/mL de cada suspensão por turbidimetria ou contagem em placa.
Confirmar a contagem em UFC inicial.
A suspensão de bactérias e leveduras deverá ser utilizada em 24 horas. A suspensão de bolores pode
ser utilizada em até sete dias se mantida sob refrigeração.
PROCEDIMENTO
Inocular cada embalagem original ou frasco com tampa estéril, com cada um dos micro-organismos
requeridos.
A concentração do inóculo utilizado deve ser suficiente para se obter uma concentração final no produto entre 1x10^5 e 1x10^6UFC/g ou mL - aplicável às categorias 1, 2 e 3.
Para a categoria 4, a concentração do inóculo deverá ser suficiente para se obter uma concentração final no produto entre 1x10^3 e 1x10^4 UFC/g ou mL.
O volume de inóculo a ser introduzido deve estar entre 0,5% e 1,0% em relação ao volume (amostra
líquida) ou peso (amostra sólida ou semissólida) total do produto.
Incubar as amostras inoculadas em estufa com temperatura entre (22,5 ± 2,5) °C.
Amostrar cada embalagem ou frasco com amostra inoculada em intervalos de 7, 14 e 28 dias.
Determinar pelo método de plaqueamento, o número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de
cada amostra, no tempo inicial e em cada intervalo de tempo especificado.
Um agente neutralizante específico deve ser incorporado nas placas de contagem ou na diluição da amostra preparada para o paqueamento.
Calcular a concentração de cada micro-organismo (UFC/mL) presente na amostra, comparar com a
contagem no tempo inicial e expressar a mudança em termos de reduções logarítmicas.
CATEGORIA DE PRODUTO E CRITÉRIOS PARA A EFICÁCIA ANTIMICROBIANA
Os produtos foram separados em quatro categorias
Categoria 2
Produtos de uso tópico, constituídos de base, ou veículo aquoso, produtos nasais não estéreis e emulsões, incluindo aqueles aplicados em membranas mucosas.
Categoria 3
Produtos orais, constituídos de base ou veículo aquoso, exceto antiácidos.
Categoria 1
Injetáveis, outros parenteais incluindo emulsões, produtos otológicos, nasais estéreis, oftálmicos constituídos de base ou veículos aquoso.
Categoria 4
Antiácidos constituído
de base aquosa