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Regeneración in vitro mediante embriogenesis somatica de variedades de…

- - - - se utilizaron frutos pequeños para extraer los óvulos
        
        Colocar los embriones en un medio de cultivo semisólido conteniendo sales y vitaminas de MT adicionado con extracto de malta y sacarosa.
        
        Realizar transferencia al mismo medio 8 semanas después.
        
        Cuatro semanas después , los explantes no necrosados se colocaron en diferentes tratamientos, usando el medio MT como base.
        
        Los explantes de los tratamientos 2 y 3 fueron transferidos a los tratamientos 5 y 6, respectivamente
    - - Se utilizaron frutos de distintos tamaños para extraer los embriones.
  - - - Colocar los embriones en frascos de vidrio conteniendo diferentes medios de cultivo
        
        Ajustar el pH a un rango de 5.7-5.8
        
        realizar autoclave a 121°C durante 25 minutos
        
        Colocar los explantes en una camara de crecimiento con una temperatura de 26 a 30°C y un fotoperíodo de 16 horas
- - - - Los explantes fueron transferidos a platos de petri
        
        colocados bajo un fotoperíodo de 24 horas de luz.
        
        Fueron transferidos a nuevas condiciones cada 4 semanas a sus respectivos medios
- - - - En un Erlenmeyer de 125 ml colocar 2g de callo friable en 10 ml de medio '1/2 + 1/2' de cultivo liquido
        
        Colocar El erlenmeyer en agitacion constante a 100-120rpm con fotoperíodo de 24 horas de luz
        
        Luego de 7 dias agregar en "Acosta 6" 20 ml de medio y en "Washington Navel" 10 ml
        
        2 semanas después se realiza el subcultivo transfiriendo a frascos erlenmeyer de mayor capacidad:
        250 ml para "Acosta 6"
        125 ml para "Washington Navel"
        adicionando 30 y 15 ml de medio respectivamente.
        
        2 semanas después se realiza otro subcultivo.
        
        "Acosta 6" se agitó fuerte para leugo vertir la mitad de su contenido en otro Erlenmeyer y se acompletó el volumen de ambos hasta 60 ml
        
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        "Washington Navel" se transfirió todo el contenido a un recipiente de 250ml y se acompletó a 60ml con medio fresco
        
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