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les méthodes de marquage et d'hybridation (I)Production de sondes :…
les méthodes de marquage et d'hybridation
I)Production de sondes :
b)Sonde d'ARN :
a) synthétise in vitro
b) produit in vitro
c)Sonde oligonucleotidique :
fabriquée par synthèse chimique
a) sonde ADN
b) fragment d'ADN
b)fragment d'ADN génomique
II)Marquage radioactif des sondes
b)marquage par déplacement des coupure
c)marquage par amorçage aléatoire
a) marquage terminale:
marquage a l’extrémité 5'
transféré le groupement 32P en position a l’extrémité 5'OH
échanger l’extrémité 5'p de l'ADN ,DB,ARN
Marquage de l'extrimitee 3'
réalise par le terminale transferase
III) Marquage non radioactif des sondes :
2) les sondes froide : DIG
cas du marquage a la DIG :
a) marquage par déplacement de coupure
b) détection par fluorescence
1)les sondes chaud : sondes radioactives
IV)hybridation moléculaire :
1)technique d'hybridation :
a)la complémentarité des bases
b) la réversibilité du processus de dénaturation et renaturation
2) facteurs influencent :
b) longeure de sonde
c)condition opératoires
hybridation en condition tres stringentes se fait a T°C elevee
hybridation en condition peu stringentes se fait a T°C basse
a) perfection de la complementation de sonde-cible
BLOT
https://www.youtube.com/watch?v=Pt_NaNExry8
A)Southern blot
https://youtu.be/TOKhHy7rU18
B)Nourthen blot
V)Puces a ADN
EX2: Micro_array
https://www.youtube.com/watch?v=Pt_NaNExry8
EX3: Puces a oligonucléotide
EX1: Macro_array au filtre a haute densité
