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第五章植物细胞培养及应用 (植物细胞培养技术 plant cell culture (植物细胞悬浮体系建立程序 (细胞悬浮系的建立 (起始…
第五章植物细胞培养及应用
植物细胞培养技术 plant cell culture
植物细胞悬浮体系建立程序
起始培养物的建立
细胞悬浮系的建立
起始:新鲜疏松易碎愈伤组织与液体培养基中，120r/min 25摄氏度 黑暗或弱光下培养
悬浮培养细胞的继代与选择：通过继代培养去掉大块愈伤组织和细胞团，保留小的细胞团直到得到均一的细胞悬浮培养体系为止。 原则：去掉大团块，保留小细胞团。 方法：过滤法、静置法、吸取法
影响因素：起始愈伤组织的质量、接种细胞密度、培养条件
悬浮细胞培养体系必须满足的条件：分散性良好、均一性良好、生长迅速
悬浮体系细胞培养同步化：饥饿法、dna抑制剂、低温法、分选法
悬浮细胞的活力和生长速度
由悬浮细胞再生植株
单细胞培养
培养方法：固体培养、液体培养、固液双层培养
难点：植物细胞的团聚性
单细胞培养概念：single cuiture 从植物器官、组织或愈伤组织游离出单个细胞进行无菌培养。
意义：基础理论研究、建立单细胞无性繁殖系……
单细胞的分离
来自完整植物器官：机械法、酶解法；来自愈伤组织；来自原生质体
植物单细胞培养特性：易形成细胞团造成细胞生长代谢的不均一性
单细胞培养方法
平板培养、看护培养、条件培养法液体浅层培养法、微滴培养法
细胞悬浮培养技术
优点（相较于固体培养基）：改善营养条件；避免局部伤害；改善气体交换
特点：细胞生长速度快、理化状态均一
发展简史
应用：人工种子、筛选突变体、再生植株、获得分离原生质体、次生代谢产物的生产
定义：cell suspension culture:是指把离体的植物组织培养物分离成游离的单个细胞或小细胞团，悬浮在液体培养基中不断扩增的技术。
细胞固定化技术
植物细胞突变体的筛选
概念及意义
优点：诱变处理的群体大筛选方便、诱变效率高筛选时间短、便于控制环境、可重复性高、便于进行遗传分析避免嵌合体
细胞突变体概念：是指植物细胞培养在附加一定化学物质的培养基上，用生物化学的方法诱导细胞遗传物质的改变，从细胞水平上进行更为可控。
植物细胞突变体的表型
细胞突变体筛选的实验体系：细胞水平上
植物细胞次生代谢产物的生产
次级代谢产物：植物种一大类非植物生长发育所必需的小分子的有机化合物，其产生分布通常具种属器官组织生长发育的特异性。
植物细胞培养生产次生代谢产物：种子细胞株的筛选及建立、种子细胞株增殖与放大、大规模培养体系的建立
提高有用物质生产效率的技术因素