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Technique de marquage et Hybridation moléculaire (Marquage radioactif…
Technique de marquage et Hybridation moléculaire
Marquage
radioactif des sondes
Marquage par déplacement de coupure
Marquage terminal
L'extrémité 3': réalisé par la terminal transférase qui catalyse l'addition de dNTP radioactive
L'extrémité 5': par l'enzyme polynucléotide kinase du phage T4
Marquage par amorçage aléatoire
4)Hybridation Moléculaire : est l'association de deux acide nucléotides SB conduisant à la formation d'une molécule double brin ou hybride.
Les facteurs qui influencent
Perfection de complémentarité sonde - cible
Longueur de la sonde
Condition opératoires
Technique d'hybridation
la réversibilité du processus de dénaturation et renaturation de l'ADN
Complémentarité des bases
Les Méthodes
Southern Blot
Principe
Transfert des fragments d'ADN sur un support
Hybridation des fragments avec une sonde
Dénaturation de l'ADN par alcaline suivie d'une neutralisation
Lavage
Électrophorèse des molécules d'ADN à analyser
Révélation
Application
Détecter un gène dans un organisme
Determiner le nombre de copies d'un gène
Faire de la cartographie
Northern Blot
meme principe sauf ce sont les ARN qui sont transféré
Pas besoin de digérer l'ARN par des E.R
ARN est dénaturé avant et pendant électrophorèse
Marquage non radioactif des sondes
Cas du marquage à la DIG
Marquage par déplacement du cours
Détection par fluorescence
Les différents type de sonde
Sonde d'ARN
Synthétisé in vivo
Produit in vitro
Sonde d'ADN
Fragment d'ADN génomique
Fragment d'ADNc
Sonde Oligonucléotide
Sonde nucléotidique: fragment nucléotidique qui permet de rechercher de manière spécifique un fragment nucléique qu'on veut étudier.