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Métodos diagnósticos (Diagnóstico Serológico (Inmunoanálisis para…
Métodos diagnósticos
principales requisitos
Elevada especificidad
Sensibilidad
Diagnóstico Molecular
Detección del material genético microbiano
Análisis electroforético del ADN y polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción
Polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)
Comparación de ADN
Utilizado para comparar ARN ribosómico 16S para identificar diferentes bacterias
Útil para distinguir entre las cepas del VHS
Detección, amplificación y secuenciado de ácidos nucleicos
Dot blot
Detección de secuencias de ADN en solución
Southern blot
Detección y caracterización de secuencias de ADN por su tamaño
PCR en tiempo real
Cuantificación de muestras muy diluidas de ADN y ARN
Northern blot
Detección y caracterización de secuencias de ARN por su tamaño
RT-PCR
Amplificación de muestras muy diluidas de ARN
ADN de cadena ramificada
Amplificación de muestras muy diluidas de ADN o ARN
PCR
Amplificación de muestras muy diluidas de ADN
Análisis de ADN mediante hibridación para captura de anticuerpos en solución
Amplificación de muestras muy diluidas de ADN o ARN
Hibridación in situ
Detección y localización de secuencias de ADN en tejidos
Detección de proteínas
Espectrometría de masas con MALDI-TOF
Utiliza peso molecular para distinguir diferentes proteinas, análisis rápido y sensible de ADN y ARN
SDS-PAGE
Separación de proteínas por su peso molecular
Identifica y distingue cepas víricas y bacterianas
Diagnóstico Serológico
Técnicas de precipitación e inmunodifusión
Inmunodifusión radial simple
Para detectar y cuantificar un antígeno
Inmunodifusión doble de Ouchterlony
Aplicada para determinar las relaciones existentes entre diferentes antígenos
Inmunoanálisis para anticuerpos y antígenos solubles
Western blot
Detección de anticuerpos específicos de antígeno
Radioinmunoanálisis
Cuantifica complejos antígeno-anticuerpo
ELISA
Cuantificación de antígenos y anticuerpos
Inhibición de la hemaglutinación
Título de anticuerpos antivíricos; serotipo de cepa vírica
Fijación del complemento
Cuantificación del título de anticuerpos específicos
Aglutinación con látex
Cuantificación y detección de antígenos y anticuerpos
Inmunoanálisis para antígenos asociados a células
Citometría de flujo con inmunofluorescencia
Análisis de la población de células positivas para antígenos
Inmunofluorescencia
Detección y localización de antígenos
Enzimoinmunoanálisis (EIA)
Detección y localización de antígenos
Microscopia y Cultivo in vitro
Métodos microscópicos
fines básicos
Detección inicial de microorganismos
Identificación preliminar o definitiva
útil para identificar
Células bacterianas
Elementos fúngicos
Parásitos
se utilizan
Microscopia electrónica
Microscopia de contraste de fases
Permite examinar detalles internos de los microorganismos
Microscopia de campo claro
3 lentes de objetivo
Alto aumento en seco 40x
Búsqueda de microorganismos grandes como parásitos y hongos filamentosos
Inmersión en aceite 100x
Observación de bacterias y levaduras
Bajo aumento 10x
Explorar muestra
Microscopia fluorescente
Microscopia de campo oscuro
Detección de bacterias delgadas
Treponema pallidum (causante de sífilis)
Género Leptospira (leptospirosis)
Métodos de tinción
Estudio directo
KOH al 10%
Facilita detección de elementos fúngicos no afectados por soluciones alcalinas fuertes
Tinta China
Principalmente usado para detectar Cryptococcus en liquido cefalorraquídeo
Preparación en fresco
Yodo de Lugol
Se añade yodo a muestras de parasitología para mejorar contraste de estructuras internas
Tinciones diferenciales
Tinción tricrómica
Tiñe protozoos
Tinción de Gram
Base para separar los principales grupos de bacterias en grampositivas y gramnegativas
Tinción de hematoxilina férrica
Detección e identificación de protozoos fecales
Tinción de Wright-Giemsa
Para detectar parásitos sanguíneos, cuerpos de inclusión víricos y por clamidias y los géneros Borrelia, Toxoplasma, Pneumocystis y Rickettsia
Tinción de azul de toluidina O
Principalmente para detección del género Pneumocystis
Metenamina de plata
Detección de elementos fúngicos, también se pueden detectar otros microorganismos
Tinciones acidorresitentes
Tinción de Ziehl-Neelsen
Para teñir micobacterias y otros microorganismos acidorresistentes
Auramina-rodamina
Tinción acidorresistente modificada
Tiñe debilmente Nocardia, Rhodococcus, Tsukamurella, Gordonia, Cryptosporidium, Isospora, Sarcocystis y Cyclospora
Tinción de Kinyoun
Mismo principio que la tinción de Ziehl-Neelsen
Tinciones fluorescentes
Tinción de naranja de acridina
Para detectar bacterias y hongos en muestras clínicas
Tinción directa con anticuerpos fluorescentes
Ha sido útil para detectar Streptococcus pyogenes, Bordetella, Francisella, Legionella, Chlamydia, Pneumocystis, Cryptosporidium, Glardia, virus gripal y del herpes simple.
Tinción de blanco de calcoflúor
Para detectar elementos fúngicos y del género Pneumocystis
Cultivo in vitro
tipos
Selectivos diferenciales
Medio de Lowenstein-Jensen
Selectivo para micobacterias
Agar Middlebrook
Selectivo para micobacterias
Agar xilosa-lisina-desoxicolato
Diferencial selectivo para Salmonella y Shigella en cultivos entéricos
CHROMagar
Selectivo, diferencial para bacterias y levaduras
Agar sal manitol
Selectivo para estafilococos, diferencial para Staphylococcus aureus
Agar inhibidor de hongos filamentosos
Selectivo para hongos filamentosos
Agar MacConkey
Para bacterias gramnegativas, diferencial para especies fermentadoras de lactosa
Especializados
Caldo de cultivo Lim
Recuperación de Streptococcus agalactiae
Agar sorbitol de MacConkey
Recuperación de Escherichia coli 0157
Agar cistina-telurito
Recuperación de Corynebacterium diptheriae
Agar Regan Lowe
Recuperación de Bordetella pertussis
Agar extracto de levadura con carbón vegetal tamponado
Recuperación de Legionella y Nocardia
Agar sacarosa, sales biliares, tiosulfato y citrato
Recuperación del género Vibrio
No selectivos
Agar Mueller-Hinton
Para estudio de susceptibilidad bacteriana
Caldo tioglicolato
Para bacterias anaerobias
Agar chocolate
Recuperación de bacterias
Agar dextrosa de Sabouraud
Recuperación de hongos
Agar sangre
Recuperación de bacterias y hongos
Bibliografía: Murray, P., Rosenthal, K. and Pfaller, M., 2016. Microbiología Médica. 8th ed. Barcelona: Elsevier.