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Técnicas de diagnóstico en virología
¿Qué es un virus?
Los virus son las partículas infecciosas de menor tamaño, con un diámetro que oscila entre los 18 y los 600 nm
Técnicas de diagnóstico directas
Detecta
Antígeno
Agente viral
Efecto citopático
Modificaciones morfológicas celulares
Provocado por
Infección viral
Identificación
Microscopía
Tinción
Ejemplos
Vacuolización
Formación de sincitios
Formación de cuerpos de inclusión
Tipos celulares para cultivo
Mono verde Africano
De riñón
Aislamiento de virus
VHS
Paperas
Rubéola
CBMC, PBMC
De humano
Aislamiento de virus
VIH (1-6)
Mono Rhesus
Aislamiento de virus
Influenza
Parainfluenza
VSR
Paperas
Sarampión
De riñón
Conejo
Aislamiento de virus VHS
De riñón
Inmunofluorescencia (IFA)
Es un inmunoensayo
Ab marcados con
Fluorocromo
Moléculas fluorescentes
Detecta antígenos específicos
Utiliza anticuerpos (Ab)
Fluorescencia
Son sustancias químicas
Absorban energía de ondas UV
Emiten ondas de distinta longitud
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Uso: Amplificación de ADN
Se puede realizar con sólo 1 copia de la secuencia
Basado en el uso de
primers
Son secuencias de nucleótidos sintéticos
Se hibridan con los moldes o templados
Molde: ADN desnaturalizado
Pasos
Desnaturalización de ADN
Acoplamiento de
primers
Elongación del
primers
Diagnóstico de múltiples agentes
FilmArray Respiratory Panel
1 prueba
20 patógenos respiratorios
Duración: 1 hora
Cinco paneles
Desventajas
Siempre busca todos los patógenos
Alto costo (7-10 000, aprox.)
Ventaja
Rápido
VERIGENE
Proceso similar al de FilmArray
Ventajas
Identificación rápida
Funcionamiento automatizado
Toma y transporte de muestras
Se refiere a la recolección y almacenamiento de la muestras infectadas para su procesamiento
Características
Aséptica
Suficiente en cantidad
Etiquetado:
Riesgo biológico*
Riesgo secundario
Datos del laboratorio al que van referidos
Datos de orientación
Señal de orientación
Tipos de tomas
Hisopados
Genitales
Rectales
conjuntivales
Mucosa oral
Lesiones cutaneas
Otros
Sangre
Lavado bronquial alveolar
Aspirado nasofaríngeo
expectoración
Orina
Liquido cefalorraquídeo
Materia fecal
Biopsias
Técnicas de diagnóstico indirectas
ELISA
(Enzyme Linked Inmmunosorbent Assay)
es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima capaz de generar un producto detectable, como cambio de color o algún otro tipo
Western Blot
(Inmunotransferencia)
en esta prueba se detectan proteínas mediante el uso de anticuerpos que a su vez están unidos a otros anticuerpos para poder detectarlo mediante quimioluminiscencia
Pasos
Bloqueo de la membrana
Se puede agregar leche al 5% para evitar que los anticuerpos se unan a proteínas no especificas y disminuir el ruido en la prueba
Incubación de anticuerpos
La membrana se incuban anticuerpo primarios para que se una a las proteínas para después agregar anticuerpos secundarios para que se unan a los anticuerpos primarios
Transferencia
Se pasan las proteínas a una membrana de nitrocelulosa. Tras la transferencia, se suele proceder a la tinción del gel con Azul de Coomassie para ratificar la presencia de proteínas en la membrana
Revelado
Se revelan los resultados mediante la quimioluminiscencia
electroforesis
Se desnaturalizan las proteínas sin cambiar su peso molecular para poder separarlas mediante su peso
Extracción de proteínas
Se obtienen las proteínas totales de la muestra
:
Elaborado por:
Torres Vera Angélica Thalia
Reyes Ocampo Angel Daniel
