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PROCEDIMIENTO ANALÍTICO - Coggle Diagram
PROCEDIMIENTO ANALÍTICO
4. Separación de fracciones libre y unida
Separar
fracciones libre y ligada
mediante partición
se separan para poder contarlas de forma individualizada
8. Control de ensayo
Muestras de control
se obtienen:
comercialmente
(control externo)
preparadas de sueros control en el laboratorio
(control interno)
Evaluación de la curva control
utiliza unos parámetros que se deben mantener constantes en evaluaciones repetidas
estos parámetros son índices de estado y comportamiento de los reactivos, condiciones ambientales, equipos y técnicas usadas en procedimientos
6. Cálculo de la curva patrón
se utilizan tres tipos de representación gráfica
En la representación semilogarítmica
En la representación logarítmica
Gráfica directa
depende de tres factores independientes entre sí
constante de afinidad del anticuerpo
concentración total del antígeno o ligando marcado
concentración anticuerpo
1. Preparación de la muestra y reactivos
Reconstruir reactivos
Identificar tubos de ensayo
Poner muestra a Tº ambiente
Descongelar muestra
2. Dispensación de volúmenes de muestra y reactivos
En los tubos de ensayo se dispensarán
volumen del antisuero (Ac)
volumen constante del antígeno marcado (L*)
volumen determinado de la alícota de la muestra problema (Lm) o de la curva patrón (Lp)
se necesita
un blanco
(preparación con la que se pretende evaluar lo inespecífico del ensayo) en el que se valore la unión no específica del antígeno marcado
se consigue incubando ligamento marcado con suero sin anticuerpo
Curva patrón
: se prepara al mismo tiempo que análisis de muestras problemas
Se aplica la técnica a una serie de tubos
Primer tubo
No contiene antígeno no marcado
los centros de unión del anticuerpo serán ocupados por antígeno marcado. Se llama
B0 o Bmax
(punto de máxima unión del antígeno marcado**
Siguientes tubos
contiene concentraciones conocidas cada vez mayores de sustancia a determinar
3. Incubación
Cada ensayo requiere unas condiciones de incubación específicas
A temperatura ambiente
obtener sensibilidad no muy importante
A temperatura baja durante largo tiempo
obtener alta precisión y reproducibilidad
5. Contaje de radiactividad de la muestra
Se suele contar la fracción unida
resultado en cuentas por minuto
Para leer radiactividad de la fase ligada
Se utiliza
contador gamma
si se utiliza tritio 125I
Se utiliza
contador beta
si se utiliza 3H
7. Lectura de los resultados
se calcula interpolando en la curva patrón la medida de radiactividad obtenida para cada tubo problema
para automatizar o semiautomatizar el proceso se utilizan:
equipos como
RIA-Mat