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Inmunoensayo enzimático (ELISA) - Coggle Diagram
Inmunoensayo enzimático (ELISA)
Se considera un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas porque una enzima se une químicamente a un anticuerpo o antígeno.
El inmunoabsorbente se refiere al hecho de que los antígenos o anticuerpos son fijados a un plástico (fase sólida).
El ELISA prueba la presencia de un antígeno o de un anticuerpo, dependiendo de qué molécula se adhirió a la placa.
La técnica de ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima (conjugado), de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática.
Control negativo
Suero sin anticuerpos contra el antígeno.
Conjugado
Antígeno o anticuerpo unido a una enzima. Dicho conjugado
debe mantener estables sus propiedades inmunológicas y enzimáticas.
Control positivo
Suero con un título de anticuerpos conocidos y específicos
contra el antígeno.
Enzima
Debe acoplarse fácilmente a antígenos o anticuerpos, ser estable tanto libre como conjugada, ser altamente reactiva, encontrarse en estado puro, disponible, a precio razonable y ser segura. Las enzimas más utilizadas son fosfatasa
alcalina, peroxidasa de rábano y ß-galactosidasa.
Anticuerpo
Al igual que el antígeno, puede estar fijado en la placa (elemento
conocido) o ser la muestra a probar (elemento desconocido).
Sustrato
Es una sustancia que modifica su estructura tras reaccionar con su enzima específica y produce un cambio que detectan los sistemas colorimétricos, fluorescentes y luminiscentes.
Antígeno
Es el analito que se puede fijar a la fase solida; puede ser el elemento conocido o provenir de la muestra a determinar (elemento desconocido).
Muestra
Puede ser: saliva, suero, plasma, orina, heces, sangre, etcétera.
Fase sólida
Es la placa de 96 pozos de fondo plano, donde las moléculas de
Antígenos o Anticuerpos se unen con la superficie de la placa a través de las fuerzas electroestáticas.
Clasificación de las pruebas de ELISA
ELISA Sándwich
Ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos
En esta modalidad se usan dos tipos de anticuerpo contra el antígeno específico, uno sin marcar y otro marcado, el primero se encuentra fijado a la placa y el segundo se añadirá después de haber agregado la muestra problema (antígeno).
Se puede
parar la reacción si se desea. La lectura se hace de forma visual o colorimétrica.
ELISA competitiva
En esta modalidad, el anticuerpo de la muestra competirá con el conjugado (anticuerpo marcado) por un número limitado de sitios de unión del antígeno.
Se fija a la placa el antígeno, se agrega el suero problema y posteriormente se añade un conjugado contra el antígeno, se adiciona el sustrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora
Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo presente en la muestra.
ELISA indirecta
Esta modalidad se diseña para detectar los anticuerpos que el individuo ha creado
contra el antígeno.
El sistema de detección emplea dos anticuerpos: uno primario
contra el antígeno y uno secundario marcado con la enzima.
El anticuerpo primario se encuentra en la muestra problema, mientras que, el secundario es parte
del conjugado (anti-inmunoglobulina marcada contra los anticuerpos en estudio).
La detección tiene mayor sensibilidad por presentar una amplificación de la señal debido a la unión de dos o más anticuerpos secundarios por cada anticuerpo
primario.
Es el ensayo más popular, pues un mismo anticuerpo secundario marcado y su
sistema enzimático permiten cuantificar una gran variedad de antígenos.
Lavados
Entre cada una de las fases de la técnica de ELISA, se deben realizar una serie de
lavados, cuya finalidad es eliminar el exceso de los reactivos.
Usos de la prueba
Enfermedades producidas por micoplasmas.
Enfermedades producidas por bacterias y sus productos: paratuberculosis,
brucelosis, enterotoxinas, estreptococosis, salmonelosis.
Enfermedades producidas por parásitos: babesias y tripanosomas, Toxocara
canis, toxoplasmosis, triquinosis.
Enfermedades producidas por virus: Aujeszky, Newcastle, fiebre aftosa, leucemia felina, peste porcina africana, peste porcina clásica, rinotraqueitis infecciosa bovina, rotavirus y artritis viral equina
Determinación de hormonas, quimiocinas, citocinas u otros antígenos en
muestras como saliva, orina, plasma, etcétera.
Rodríguez Saucedo Angélica 1506