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CLONAGGIO (Frammentazione (meccanica (acoustic shearing, sonicazione,…
CLONAGGIO
Frammentazione
DNA ligasi
batteriofago T4
meccanica
acoustic shearing
sonicazione
nebulizzazione
enzimatica
DNAsi
enzimi di restrizione
nucleasi di precisione
tipo I
tipo II
trasposasi
tagmentation
chimica
calore
ioni metallici bivalenti
Vettori di clonaggio
caratteristiche
origine di replicazione
marcatori di selezione
siti unici di restrizione
tipologie
plasmidi
pBR322
fagi
cosmidi
BAC
bacterial artificial chromosome
geni regolatori del fattore F
polylinker
marcatori di selezione
YAC
selezione vettori
trasformati/transfettati
inattivazione inserzionale
e
replica plating
a-complementazione
screening bianco-blu
Trasformazione batterica
chimica, CaCl2+4°,
competenza
elettroporazione
gene gun
PRODUZIONE DI PROTEINE ETEROLOGHE
vettori di espressione
oriC
marker selezione
segnali inizio e fine della traduzione
purificazione
tap-tagging->6-7 His
tandem affinity purification
Colonna Ni
2.elettroforesi
Western Blotting (immunoblotting)