Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS (Actividad Biológica ( ( Toxina Una unidad de…
PURIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
PURIFICACIÓN
Proceso que cuenta con varias etapas cuyo objetivo es lograr la
concentración diferencial de la proteína o molécula de interés
Actividad Biológica
Un efecto biológico (Muerte celular, hemólisis, protección inmunológica) .Variación en la cantidad de una sustancia química (producto de una reacción) De esta forma podemos definir a la unidad de actividad biológica como : Una unidad de Actividad Biológica es la cantidad de proteína que produce una determinada cantidad de “efecto”
Toxina Una unidad de AB para una toxina es la cantidad de proteína que produce la muerte del 23% de los r atones de tal especie (siguen especificaciones…)
Enzima Una unidad de AB para una enzima es la cantidad de proteína que produce 5.98 moles de producto en 1 minuto en condiciones …(siguen especificaciones…)
PROCESO DE PURIFICACIÓN
Definir un ensayo específico que identifique a la proteína (actividad biológica) (específico, sensible, rápido y barato).
Elegir la fuente (matriz biológica).
Extraer la proteína de la fuente (proteínas intraceluares o extracelulares)
Estabilización de la molécula
Aislamiento y concentración (fraccionamiento)
Determinar la pureza y calidad del producto final
Extracción de la proteína de la fuente
Lisis osmótica: técnica muy suave. Uso de sn hipotónicas + fuerzas mecánicas. Para bacterias y células vegetales:
lisozimas u otras enzimas Molienda: a. Morteros b. Batidoras. Uso de sustancias abrasivas Ultrasonido: sonicador. Eleva mucho la temperatura de la muestra
Estabilización
1 PH
2 Grado de oxidación (-SH)
3 Presencia de Metales pesados. Sustancias Contaminantes
4 Polaridad y fuerza iónica de la solución
5 Presencia de proteasas
6 Temperatura
5 Actividad de la molécul
Aislamiento y concentración
Implica una serie de pasos en los cuales se aprovechan propiedades fisicoquímicas o biológicas de la proteína de interés para separarla del resto de las moléculas
Cada paso debe ser monitoreado adecuadamente para evaluar el rendimiento en la purificación, pureza y actividad específica de cada fracción obtenida.
Si bien no hay una sola secuencia de técnicas a seguir, en general se recomienda empezar por técnicas de alta capacidad y seguir con las de baja capacidad.
• En general se desea obtener una gran pureza (según los objetivos) acompañada de un gran rendimiento.