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DOSAGES HORMONAUX Etapes analytiques (GARANTIR QUALITE DE DOSAGE (Notion…
DOSAGES HORMONAUX
Etapes analytiques
DOSER LES HORMONES
problématiques
En faible quantité
Cholestérol : 5 mmol/L
Hormones thyroïdiennes : 5pmol/L
Estradiol : concentrations très différentes selon les conditions physiopathologiques
Qui lui ressemble
Endogène :Ressemblance catécholamines/stéroides
Exogène (prise de médoc) : cortisol/prednisolone
FSH : différents sites possibles de glycosylations qui peuvent être différents d'un individu à un autre
Qui nous gênent
Il faudrait pouvoir distinguer, lors du dosage, la forme libre de la forme liée mais difficile en pratique
Hormones thyroidiennes (T3 et T4) principalement liées à TBG (très faible proportion est libre)
Testostérone qui est liée à la SHBG (dosage forme libre compliquée +++)
GARANTIR QUALITE DE DOSAGE
Notion d'erreur
pas de
"vraie valeur"
, difficile d'avoir un standard absolu qui fait office de référence
pas toujours facile d'avoir une
technique de référence
(mais tjs des erreurs)
Tout résultat biologique est entaché d'une erreur
Erreurs aléatoires
, de signe et de grandeur imprévisibles (existent tjs mais à minimiser)
Courbe de Gauss
Ensemble de variations non parfaitement
maitrisées dans le processus (environnement, personnel...)
Erreurs systématiques
, de même signe par rapport à la valeur vraie (caractéristiques de technique utilisée)
sur-estimation ou une sous-estimation des résultats du dosage qu'on utilise lorsqu'on compare avec les résultats obtenus grâce à la technique de référence
liées à un choix fait au départ
Donc plus l'écart-type est étroit, moins la méthode est sujette aux erreurs aléatoires et plus les deux courbes de Gauss sont superposées, moins la technique est sujette aux erreurs systématiques.
Critères de précisions
Répétabilité
grâce à la
détermination d'un coefficient de variation CV
intra-série (=intra-essai)
inter-série (=inter-essai)
inter-lots
inter-laboratoires
Critères de justesse
(voir schéma cible)
comparaison entre les deux méthodes c'est-à-dire la technique de référence (méthode A) et la technique de routine (méthode B) sur un panel d'échantillons
Biais constant (quelle que soit la concentration)
Biais variable
Critères de sensibilité
l'aptitude d'une méthode à différencier deux
signaux fournis par deux échantillons de concentration voisine
on la détermine dans les valeurs basses
On détermine ainsi la plus petite concentration pour laquelle la précision présente un CV inférieur à 20%
Critères de spécificité
l'aptitude à mesurer l'analyse désirée et seulement
celui-ci même en présence de quantités importantes de substances dont la structure est proche
Exemple : concentration du cortisol et uniquement du cortisol sans doser en même temps la
prednisolone
Suivi de la qualité d'une technique
Contrôle qualité interne :
dosés à chaque série de dosages et ils permettent de vérifier les conditions
->évaluer des erreurs à la fois aléatoires et systématiques
-> diagramme de Levey Jenning
Contrôle qualité externe:
dosés ponctuellement 1 à 6 fois par an et permettent une comparaison entre les laboratoires
->évaluer l'erreur systématique de notre dosage
COMMENT DOSER LES HORMONES
Immunodosages
méthode quantitative
immunoréaction
détection du complexe indirecte (marqueur sur Ag ou Ac)
réaction réversible = constante d'équilibre
dosages par compétition
Ac fixé sur support
relation inversement proportionnelle entre la concentration d'hormones du patient et la proportion de complexes formés c'est-à-dire de signal délivré par le traceur (les molécules du patient sont celles non marqués -> on détecte les marqués donc au final c'est inversement proportionnelle)
dosages de petites molécules
Inconvénients : manque de spécificité, réactions croisées
dosages sandwich
hormone prise en sandwich entre ces deux anticorps dont l'un porte le
traceur
proportionnelle à la quantité de complexe formés
peptides et protéines
inconvénient : pas pour petites molécules + effet crochet
Techniques chromatographiques
semi-automatisée
extraction
injection
détection
analyse du signal
séparer
différentes molécules d'intérêt selon leurs
propriétés physico-chimiques
Détecteurs :
électro-chimique (oxydo-réduction) : catécholamines
spectrométrie de masse : stéroides
Avantage : spécificité
Inconvénient : coût, personnel qualifié, temps d'analyse long