Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
分析_儀器分析 (光譜法 (共同光譜儀儀器構造 (照射源 (鎢絲燈（350~2500nm
氘燈（180~460nm), 檢測器,…
分析_儀器分析
光譜法
共同光譜儀儀器構造
照射源
- 鎢絲燈（350~2500nm
- 氘燈（180~460nm
-
-
-
-
-
原理：電磁輻射能量與待測物交互作用,產生訊號源,不同物種有不同程度的吸光度,產生不同高低波峰,即光譜
光譜計
一、可見光/紫外光 光度計(V/US)
- 原理：藉紫外光(200~300nm)或可見光9360~800nm)
使特定物質吸收,由基態轉變為激發態,測量吸收光強度變化
求出吸光度。
-
二、原子吸收光譜(AAS)
- 原理：先加溫將物質化學鍵形成穩定的基態原子,以特定波長光源照射,使電子轉移形成自由態,原子由基態至自由態會吸收能量,不同元素吸收不同波長而產生吸收光譜,由光譜判定物質。
-
- 優缺：偵測極限低(ng)、靈敏度高、選擇性高、測特定金屬濃度
三、紅外線吸收光譜(IR)
- 原理：利用分子不同官能基吸收特定波長的紅外線,官能基會產生震動與轉動,再用全光譜掃描,檢測光譜分布與強度,推算出化合物官能基種類。
-
- 優缺：可做官能基判定、非極性化合物需衍生化、光學結構無法辨別
質譜法
- 原理：將樣品游離轉變為帶電的片段離子,再加以磁場使不同離子片段飛落收集器,產生放大電流,紀錄飛行時間推斷待測物種類。
-
-
層析法
一、層析計算/名詞：
- 理論板數=N=L/H =管柱長/理論板高
理論板數=16(tR/W)2 =16*(滯留時間/波寬)平方
- 解析度：用以評斷同法對兩物質的辨別度
解析度Rs=2△T/W1+W2 =波峰距離/波寬1+波寬2
- 標準法：分析標準品以析出量與時間作標準曲線,比較待測物比較計算
①內標法：標準品加入待測品同時分析//通常用相似物//多用於GC
②外標法：取不同濃度標準品另外分析作標準曲線//標準品即檢測物//多用於光譜分析,LC
二、管柱層析
-
-
-
-
親和層析：固相結合活性物質 ex.抗體,抗原 具專一性
濾紙層析：毛細現象,測Rf=樣品移動距離/溶劑移動距離
-
三、高效液態層析 HPLC
- 原理：利用固相和樣品吸附程度不同,產生不同移動速率,再以高壓液相沖提使反應分離加快,提高分離速率增加解析度,依滯留時間推斷樣品
-
HPLC常用檢測器：
- 可見光/紫外光偵測器：氚鎢絲光源→濾光片→樣品→吸光變化
優：方便常用便宜,靈敏度高,溫度影響小
- 螢光檢測器：光(激發光)→樣品→吸光值
優：靈敏高(ng) 缺：樣品需衍生化
- 示差折射光偵測器：測物溶於折射→折射光
優：方便 缺：需可透光,受溫度影響
- 電化學檢測器：有氧化還原產生導電→用安培計測電流
優：最靈敏
四、氣相層析 GC
- 原理：氣體移動相使樣品通過管柱,產生化合物被分離之效果,再由偵測器測樣品,樣品有熱不穩定,極性,無揮發性時需進行衍生化
-
電泳
- 原理：帶電分子在電場作用下,向其電性相反的電極移動,以電流梯度方式來分離化合物之生化技術
-
-
①SDS-PAGE：膠體,SDS為強陰離子表面活性劑,可切斷氫鍵破壞2.3級結構,硫基可破壞4級結構,PAGE為凝膠主結構流動率與分子量成反比。
②2D-Gal：雙向凝膠電泳,1為電泳IEF-Gal依照pI值不同分離,2為方向SDS-PAGE依不同分子量分離,兩同用可增加解析度
③PFGE 脈衝電泳法：電泳場中電場不斷有夾角的反覆變化,小分子轉向移動快,大分子困難,可增加解析度
④Western blot 西方點墨法：為電泳蛋白質轉漬法,再緩衝溶液下按負極至正極依序排列→海棉片-濾紙-PVDF膜-SDS-PAGE-PVDF-濾紙-海棉片,再施以電場,使蛋白質轉漬至PVDF膜上