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Méthodes d'analyse (Extraction ADN (1- Elimination protéines + lipides…
Méthodes d'analyse
Extraction ADN
A partir
Tissu
Sang
Organe
1- Elimination protéines + lipides
Phénol
organique
dénature protéines
Chloroforme
Rend phénol non miscible
Dissous lipides
SDS
Eau
2- Agitation
Vortex
Émulsion
3- Centrifugation
2 phases
Aqueuse
Acides nucléiques
Organique
Lipides...
Interface
Anneau blanchatre
Protéines dénaturées
4- Purification
éthanol
--> précipitation
Mesure
Concentration
Absorbance
1A = 50ug/ml
260 nm
Pureté
Contamination
Protéines
Absorbance
280 nm
Rapport 260/280
Pur --> 2
Contaminé --> <2
Électrophorèse
Gel d'agarose
Utilité
Analyse protéines
Visualisation ADN
Estimation
Quantité
Topologie
Taille/poids moléculaire
Gel
Coulé
Moule
Avec peigne
Cuve
Tampon
Électrodes
Positive
Anode
Négative
Cathode
Avec
Colorant
Marqueur migration
Chargé -
BET
intercalant
Fluorescent
Orangé
UV
= Bromure d'éthidium
!! cancérigène
Migration
Selon
Taille/poids moléculaire
Comparaison
Gamme étalon
long --> migre moins
Topologie
Surenroulé migre vite
Linéaire moins rapide
Circulaire ouvert plus lent
Gel de polyacrylamide
Surtout protéines
Couche très mince
1 mm
Verticale
Cathode
haut
Anode
Bas
Intérêt
Haute résolution
1 base
Inconvénient
Très court
50 nt
!! neurotoxique