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Réaction Ag/Ac (Réaction d'agglutination (Système ABO (Ac isotype IgM…
Réaction Ag/Ac
Réaction d'agglutination
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Critères de pH, température, c° Ag et Ac, nature des Ac (isotype)
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Technique d'inhibition de l'agglutination (test de grossesse avec Ac et billes d'hormones) : lorsque femme enceinte beaucoup d'hormone donc Ag en excès empêchant l'agglutination (qui se ferait à l'equivalence)
Intro
Ag + Ac :left_right_arrow: AgAc avec k1 constante d'association, k2 de dissociation et k la constante d'équilibre = k1/k2
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2 sources d'Ac :
- Anticorps polyclonal = mélange d'Ac d'un sérum d'individu immunisé
- Anticorps monoclonal = un seul type d'Ac produits pas cellules hybridomes B (=fusion LB et cell tumorales, généralement myélome afin de garder LB en culture)
Dosage immunologie
ELISA : dosage immuno enzymatique pour mesurer c° Ag ou Ac → direct (dosage Ac), en sandwich (dosage Ag avec Ac dans puits), de compétition (dosage Ag avec Ag dans puits) cf fiche
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Test radio immunologique (RIA) : Ajout Ag viral radiomarqué (iode125) → compétition entre Ag viral d'un individu et Ag radiomarqué, si fixation avec Ag viral pas beaucoup de radioactivité mais si individu sain bcp de radioactivité car Ag marqué se fixe
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Réaction avec complément
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Technique de déviation du complément :
- Mélange de l'Ac à doser avec l'Ag qui nous interesse, en présence de complément
- Formation de complexes immuns AgAc donc fixation du complément formant complexe Ac/Ag/Complément (il peut rester des compléments libres)
- Mesure du complément disponible par addition de GR dits sensibilisés (recouverts d'Ac anti GR), les compléments libres vont s y fixer entraînant lyse des GR (se voit à l'oeil nu)
→ technique pour repérer présence Ac dans un échantillon
=> lorsque limpide, pas d'Ac donc individu sain, lorsque trouble, individu malade
Déplétion d'un type cellulaire :
- Marquage des cellules avec Ac spécifique d'un marqueur membranaire
- Addition de complément induisant la lyse des cellules recouvertes d'Ac
→ exemple avec LT, on a un mélange de LTCD4 et LTCD8 et on veut se debarasser des CD8. Elimination en ajoutant Ac anti CD8 puis compléments qui vont se fixer aux complexes AcAg ce qui va entraîner la lyse de la cellule donc des LTCD8
Techniques d'études in situ (marquage des tissus), ex et in vitro
Permet de localiser Ag dans l'organisme ou sur une suspension cellulaire, cela se fait grâce à des Ac spécifiques que l'on couple à un fluorochrome, enzyme ou radioélement → immunofluorescence :
- directe : Ac reconnaît Ag que l'onr echerche
- indirecte : Ac primaire spé de l'Ag puis révélation avec 2e Ac qui va se coller au 1er et qui est couplé avec fluorochrome, pour cela on doit connaître isotype du 1e Ac et d'où il provient pour pouvoir le cibler avec le 2e
Aujourd'hui on utilise surtout cytométrie en flux (FACS) avec résultats en cytogramme ou histogramme (% des cellules qui expriment et qté exprimée sur ces cellules)
Immunohistochimie en microscopie electronique : utilisation Ac liés à de l'or colloïdal (car dense en électron), deux diametres différents pour faire différence entre 2 Ac différents
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