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Extração de DNA (ETAPAS E FUNÇÃO (1-> Rompimento do envoltório celular)…
Extração de DNA
ETAPAS E FUNÇÃO
1-> Rompimento do envoltório celular
2->Eliminar o RNA
Adição de RNases a solução
3-> Remoção dos contaminantes
Coluna de ADSORÇÃO do DNA
FENOL/ CLOROFÓRMIO
4-> Precipitação e purificação do DNA
No final da etapa 3 ainda terá resquícios, ou seja falta purificar totalmente o DNA
Adição de ISOPROPANOL >>>> fará com que o DNA precipite, logo em seguida CENTRIFUGAMOS para que as moleculas de DNA grudem no fundo do recipiente
Com as moléculas de DNA grudadas podemos realizar a lavagem do recipiente que não afetará o DNA
Os contaminantes como estaram degradados eles formaram COMPLEXOS INSOLUVEIS
Adição de fenol/clorofórmio seguido de agitação [ centrifugação] formará duas soluções visíveis >>> AQUOSA( DNA), ORGÂNICA (complexos insolúveis)
Apesar de destruídos os contaminantes ainda se encontram presente precisamos remove-los
Material genético é circundado pelo ENVOLTÓRIO CELULAR( membrana nuclear, parede celular), é necessário então sua remoção
Ação enzimatica
Detergente (quebra dos lipídios)
Abrasão fisica
Pressão osmótica
Aquecimento
OBS: Agora todo o conteúdo da célula esta espalhado pela solução ( DNA, RNA, ENZ, PROT, CARB)
OBS2: é importante a utilização de PROTEINASES para destruir as DNases >>> durante esse processo
Princípio:
Para extrairmos DNA precisamos coletar células
Substâncias presentes nas CÉLULAS
Proteinas( eliminado após a primeira etapa)
lipídios (Eliminado após a primeira etapa)
Ácidos nucleicos >>>DNA e RNA (RNA eliminado após a segunda etapa)
carboidratos
Íons e vitaminas
CONCLUSÃO: precisa separar o DNA das substâncias que não interessaram