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Extraction et dosage (Dosage des acides nucléiques (Absorbance (Protéine :…
Extraction et dosage
Dosage des acides nucléiques
Spectrométrie
: proportionnalité entre
absorbance à 260 nm mesurée
et
concentration en AN
Permet d'avoir idée approximative de la
quantité
d'ADN dans le tube
ADN double brin : 1 unité de DO =
50µg/ml
ARN : 1 unité de DO =
40 µg/ml
ADN simple brin : 1 unité de DO =
33µg/ml
Absorbance
Protéine : 280 nm
AN : 260 nm
Rapport DO 260 / DO 280
Rapport
entre 1.7 et 2
: extraction OK
Rapport
< 1.7
: refaire extraction, beaucoup trop de protéines
Autre technique :
fluorométrie
Séquençage de plus petite quantité ADN / ARN mais moins pratique
Utile pour séquençage à au débit
Extraction d'ADN
Kits commercialisés
FTA Card
Méthode au phénol-chloroforme
Précipitation : ADN solide
Redissolution : ADN pur et concentré
Extraction par phénol-chloroforme / Déprotéinisation
Dosage et vérification quantitative et qualitative
Lyse des cellules
Automates
Extraction d'ARN
Même étapes mais avant nécessaire de
transformer ARN en ADN
(reverse transcriptase)