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CRISPR/Cas9 as tool for functional study of genes Involved in…
CRISPR/Cas9 as tool for functional study of genes Involved in preimplantation embryo development
Introducción
Ventajas de la técnica
Focalización del genoma
Es programable
Permite diseñar los módulos de unión al ADN
Util para caracterizar genes relacionados con embriogénesis
CRISPR/Cas9
Herramienta utilizada para editar genes y por consigueinte modificar el genoma
Se compone de
Familia de secuencias de ADN
Nucleasa
Generando
Organismos Knock-out/in
Metodología
Maduración de ovocitos porcinos
Activación partenogenética y cultivo in vitro
Generación de OCT4- GFP contructos knock-in
Inyecciones de Cas9/ARNgs
Generación de ARNm y ARNgs de Cas9
Se tomó el plásmido y se lienalizó con enzima SphI
Transcripción del plásmido linealizado
Degradación de DNA y purificación del extracto
Preaparación de ADN genómico y ampliación
qPCR
Tinción
Análisis de datos
Objetivo
Estudiar la viabilidad del sistema CRISPR/Cas9 en el estudio de genes relacionados con la embriogénesis en embriones partenogenéticos porcinos.