Lääkeaineen pKa-arvon määrittäminen potentiometrisella titrauksella
Koeasetelma
Menetelmän perusteet
Virhelähteet
Potentiometrisen titrauksen merkitys lääkeanalytiikassa
pH-mittarin kalibrointi virheet. Unohtaa huuhdella elektroidin, kalibrointiliuoksien sekoittaminen, elektroidi koskettaa seinää tai magneetti sekoittajaa. Elektroidin kontaminoituminen esim. likaisella hanskalla koskettaminen. Kalibrointiliuoksia ei sekoiteta kunnolla.
Kalibroidaan pH-mittari
Bentsoehappoliuoksen valmistus 0,02 M, liukenee erittäin hitaasti, joten anna aikaa
Mitataan liuosta 20 ml dekanterilasiin, laimennetaan vedellä, jotta elektroidi uppoaa liuokseen.
Mkitataan liuoksen pH ja jännite (mV)
Aloitetaan titraus lisäämällä 0,5 ml kerrallaan NaOH ja odotetaan että jännitelukema tasaantuu. Kirjataan jokaisen lisäyksen jälkeen muistiin jännite.
Vähennetään lisäys määrä 0,2 ml kerrallaan.
Mitataan liuoksen pH
Asettele byretti, jossa NaOH 0,1 M pH-mittarin viereen. Pidä elektroidi koko titrauksen ajan liuoksessa.
Bentsoehappoliuoksen valmistusvirheet. Jos ei anna bentsoehaponliueta tarpeeksi. Sattuu lasku tai punnitusvirhe (analyysivaa´an kalibrointi tai liian painavat punnitus astiat.)
pH-mittarin käyttö. Virheitä: elektroidi koskee dekanterilasin reunaa tai magneetti sekoittajaa, elektroidia ei pidetä liikkumatta tai elektroidi poistetaan liuoksesta kesken titrauksen.
Annetaan tasaantua lukemien rauhassa lähestyttäessä 100 mV.
Jos titrauksessa ei käytetä tarpeeksi voimakasta sekoitusta, ei liuos pääse sekoittumaan kunnolla, eikä pH-mittari pysty mittamaan oikeaa lukemaa.
Jos ei anneta jännitelukemien tasaantua tarpeeksi rauhassa, ei saada oikeita tuloksia.
Menetelmän perustana on tieto, että pKa-arvo vastaa sitä pH:ta, jossa hapon ja sen konjugaattiemäksen konsentraatiot ovat yhtä suuret.
Happonäyte titrataan potentiometrisesti ja
Potentiometrisen titrauksen avulla voidaan määrittää lääkeaineideiden pKa-arvoja. pKa-arvojen avulla voidaan ennustaa lääkeaineen käyttäytymistä elimistössä. Voidaan siis arvioida onko lääkeaine molekyyli- vai ionimuodossa kehon eri osissa eri pH:issa.
Potentiometrista titrausta voidaan käyttää myös silloin, kun lääkeaine on hyvin heikko happo- tai emäsominaisuuksiltaan tai jos lääkeaine on värillinen, eikä värimuutokseen perustuvaa titrausta voida käyttää.
Byretin epäpuhtaudet, ilmakupla mittaliuoksessa. Byretin väärin lukeminen.
Laskuvirheet! Väärien tulosten kirjoittaminen
Byretin epätarkkuus! 0,2ml on vaikea arvioida byretillä.
Kalibrointiliuoksien pH? Onko oikea, onko joku muu ennen sekoittanut liuoksia, unohtanut kuivata tai pestä elektroidin, jolloin kalibrointiliuoksen pH muuttuu eikä pH-mittari kalibroidu oikein.
Onko NaOH mittaliuos tarkan vahvuista? Jos ei ole niin titraus ei onnistu, sillä laskuissa tarvitaan NaOHin pitoisuus.
Byretin vuotaminen! Jos hana on löysä ja vuotaa. Jos hana jätetään näyteliuoksen päälle odottelun aikana, voi byretti tiputella mittaliuosta näytteeseen. Byretti tulee siirtää pois näytteen päältä.
Titrataan kunnes saavutetaan ekvivalenttipiste
Lasketaan mittaliuoskulutus ekvivalentti pisteessä.
Mittaliuoskulutuksen avulla saadaan hapon ainemäärä ja konsentraatio. Tästä lasketaan Ka-arvo ja niin edelleen pKa-arvo.
Jos taas sekoittaminen on liian kovalla, se voi roiskua yli. Jos pyörteeseen sekoittuu ilmaa niin ja elektroidi mittaa ilmakuplien pH-arvoa, ei liuoksen.
Lämpötila vaikuttaa siihen mitä mittari näyttää! Lämpötilan täytyisi olla vakio! Ei kuitenkaan pysynyt vakiona vaan vaihteli.