Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV…
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV menetelmällä
Perusteet
HPLC-UV
Korkean erotuskyvyn nestekromatografia
Pumppu pumppaa liikkuvaa faasia kolonnin läpi
Liikkuva faasi kuljettaa analyyttimolekyylejä
Analyytit muodostavat vuorovaikutuksia stationäärifaasin kanssa
Kolonnissa tapahtuu näytteen erottumista
Näytevyöhykkeet näkyvät detektorista
Tiedonkeruulaitteisto muuttaa detektorin datan kromatogrammiksi
Esikäsittely
Näytteen puhdistus
lääkevalmiste yksinkertaisempi kuin biolog. näyte
Kiinteäfaasiuutto vallitseva uuttomenetelmä
Pitoisuuksien konsentrointi
HPLC- UV:n merkitys lääkeanalytiikassa
Pitoisuuden määrittäminen
Keskeinen kvantitatiivisessa analytiikassa
Toistettavuus
Soveltuu epäorgaanisten, orgaanisten ja peptidien analytiikkaan
Aineen tunnistaminen
Spesifiset retentioajat
Verrataan vertailunäytteisiin
lähisukuisten yhdisteiden tutkiminen
metaboliittien analysointi
Muut virhelähteet
Laimennokset tehty väärin
Virheet suorassa/ pitoisuudessa
HPLC
Virtausnopeus ei ole isokraattinen
Muutokset retentioaikoihin
Liikkuvassa faasissa ilmaa
Muutokset liikkuvan faasin liikkumisessa ja retentioajoissa
Liikkuvan faasin pH muutokset
Aineen ionisoituminen vaikuttaa sen retentioon
Suodatusta ei tehdä/ se epäonnistuu
Näyte voi saturoitua HPLC:ssä
Epäpuhtauksia
Laskuvirheet
Väärät arvot, huolimattomuus, väärä laskutapa
Välineet
Vaaka
Tulosten kirjaamisvirheet
Puhtaus
Oikea käyttö
Siirtäminen
mittapullo
Epäpuhtaudet
Merkintä --> sekottuminen
finnpipetti
Oikea pipetointitilavuus
Väärä tarkkuus voi vääristää kalibraatiosuoraa
puhtaat kärjet
Koeasetelma
Tehdään Aspirin jauheesta liuos
Tehdään 1/10 laimennos
Osanäytteet suodatetan ruiskusuodattimella laimeimmasta vahvimpaan
St. näytteet ja tutkittava näyte analysoidaan HPLC:llä
Väärä suodatusjärjestys
voi vaikuttaa pitoisuuksiin --> virheellinen standardisuora
Suodatinta ei huuhdella seuraavalla suodatettavalla liuoksella
Valmistetaan standardinäytteet (10mg/ml)
Tehdään laimennokset (100-500 ug/ml)
Virheet punnituksissa, mittauksissa, pipetoinnissa
Virheellinen kalibraatiosuora
Virheet näytteiden pitoisuuksissa
Tulosten laskeminen
Kromatogrammista tunnistetaan ASA:n signaali (piikki)
Integroimalla saadaan piikin pinta-ala
St. näytteiden pinta- alojen avulla laaditaan kalibraatiosuora
Kalibraatiosuoran yhtälön ja tutkittavan näytteen ASA piikin avulla näytteen pitoisuus