Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV …
3.1 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV -menetelmällä
virhelähteet
HPLC-UV -menetelmä
virheellset kytkennät laitteistossa
väärä aalllonpituus detektiossa
näytepullot asetettu väärin laitteeseen
vääräeluentti
väärä kolonni -> väärät tutkittavan aineen retentioajat
ilmaa päätyy laitteistoon
analyysipulloiss ei tarpeeksi näytteitä
lämpötila+ph retentioaikoihin
nestekromatografinen pitoisuusmääritys
Näyte
punnittu virheellinen massa tablettijauhetta niin, ettei vastaakaan 40 mg ASA:a
ASA:a hajonnut säilytyksessä tableteista, ei saada oikeaa ASA-määrää
laimennos: käytetty väärää liuosta laimentamiseen, pipetoitu väärä tilavuus ASA-liuosta
näytteen ei anneta seistä ennen laimennusta
laimennokseen päätyy tablettinäytteen liukenemattomia hiukkasia (tärkkelys), jotka voivat tukkia ruiskusuodattimen tai analyysilaitteistoon päästessään häiritä analyysiä tai rikkoa laitteen
ASA liuotettu huolimattomasti -> laimennokseen päätyy liukenematonta ASA:a, joka voi liueta ja nostaa laimennoksen konsentraatiota
kiinteää asaa jää pullon reunalle
epäpuhtaudet tableteissa
tulosten laskeminen
väärät yksikkömuunnokset esim. massaprosentteja laskettaessa
kalibraatiosuora
standardinäytteiden todelliset pitoisuudet (pipetoinnin seuraus) jätetään huomiotta
kuvaajien virheellinen tulkinta
laimennoskerroin
ruiskusuodatus
ruiskulla otetaan kaikkia suodatettavia liuoksia niin, että ruisku upotetaan liuokseen -> kontaminaatio ulkopuolella, vaikka sisäpuoli huuhdellaan jäteastiaan ennen seuraavaa suodatusta
Standardinäytteet
Näytteet sekoittuvat keskenään -> standardisuora vääristyy
Pipetoitu väärä määrä kantaliuosta
käytetään väkeviä liuoksia laimennoksen sijaan
Näytteen esikäsittelyn perusteet
ennen näytteen syöttämistä HPLC-laitteistoon tai muihin analyysilaitteisiin näyte on puhdistettava esimerkiksi ylimääräisistä hiukkasista -> ruiskusuodatus
myös muut suodatusmenetelmät
Esikäsittelyn avulla vierasaineiden poiston ansiosta saadaan helpommin luettavia kromatogrammeja (piikkien määrä vähenee -> oleelliset piikit helpompi nähdä)
HPLC-UV-menetelmän perusteet
HPLC-laitteisto, jossa UV-detektori
Injektori injisoi näytteen liuotinvirtaan, joka kuljjettaa sen kolonniin
Kolonnissa tapahtuu erottelu
Analyytin pooliset/poolittomat vuorovaikutukset stationäärifaasin kanssa
Pumppujen tuottama nestevirta on tasainen, jotta vältytään ilmakuplien muodostumiselta laitteistoon. Ilmakuplat vievät tilaa kolonnista/tukkivat sitä, mikä vääristää detektiota ja siten kromatogrammia
UV-detektio: neste virtaa läpivirtauskyvetin läpi, johon säteilytetään UV-valoa. Kyvetin toisella puolella on detektori, joka siirtää havaitsemansa tiedot tiedonkeruuyksikköön --> kromatogrammi
Detektori havaitsee, mitä aallonpituuksia valotiehen saapuva molekyyli absorboi. Kromoforit. Pii-elektronirakenne. Ei saada tietoa muusta rakenteesta
Näytteen pitoisuusmäärityksen koeasetelma
Punnitut tabletit hierretään huhmareessa hienoksi, tablettijauhe punnitaan vastaamaan 40 mg ASA:a. Jauhe liuotetaan etanoliin ja laimennetaan. Tästä otetaan näyte, joka laimennetaan fosfaattipuskuriin
Kaikkien näytteiden suodatus ruiskusuodattimella HPLC-analyysipulloihin
Standardinäytteet valmistetaan kantaliuoksesta laimentamalla pieniin mittapulloihin
HPLC-UV-analyysi
tulosten laskeminen kromatogrammien perusteella
valmis vesiliuos, laimennetaan
rasitusolosuhde-asa myös
merkitys analytiikassa