Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV …
Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen tablettinäytteestä HPLC-UV -menetelmällä
HPLC-UV menetelmän perusteet
HPLC on kromatografinen menetelmä, jonka avulla voidaan erottaa, tunnistaa ja analysoida yhdisteitä
Laitteisto
Pumput
Vetävät eluenttiliuosta liuotinpulloista laitteistoon
Injektori
Paikka, johon näyte syötetään
Kolonni
Osa, joka on päällystetty stationäärifaasilla ja jossa näytekomponenttien varsinainen erottuminen tapahtuu
UV-detektori
Kerää sähköisen signaalin
Tiedonkeruulaite
Muuttaa detektorin datan kuvaajaksi eli kromatogrammiksi
UV-detektori
Mittaa kolonnista eluoituvan liikkuvan faasin UV-absorptiota
Tiedonkeruuyksikkö tuottaa kromatogrammiin signaalin, kun näytemolekyylien vyöhyke eluoituu kolonnista ja UV-absorptio kasvaa
Kromatogrammi kuvaa HPLC-analyysiä ajan funktiona (y-akseli: absorbanssi ja x-akseli aika)
HPLC-UV menetelmä on tarkka, toistettava ja vakaa menetelmä kvantitatiiviseen analysointiin
Merkitys lääkeaineanalytiikassa
Lääkevalmisteiden analysointi
lääkeaineiden stabiilisuustutkimukset
lääkeaineiden metaboliittien analysointi biologisista näytteistä
Lääkeaineiden jakautumiskertoimien ja pKa-arvojen määrittäminen
Pitoisuusmäärityksen koeasetelma
Valmistetaan ASA:sta neljä eri näytettä
Valmiina ollut ASA:n vesiliuos
Rasitusolosuhde ASA:sta valmistettu liuos
Vastavalmistettu ASA:n vesiliuos
tabletista valmistettu ASA:n liuos
Punnittu 10 aspiriini tabletin massa. Laskettu tarvittavan jauheen massa laskemalla ensin yhden tabletin massa ja verrannon avulla laskettu kuinka paljon 40mg vastaava jauheen massa on (47,7mg)
Jauhe liuotettu etanoliin
Lisätty merkkiin asti etanolia ja annettu seistä hetkeen aikaa, jolloin mahdollinen sakka (apuaineet) on laskeutunut mittapullon pohjalle.
Liuoksesta otettu 1,0ml 10ml:n mittapulloon ja laimennettu fosforihappoliuoksella
Näyttiestä tehdään laimennokset (kaikki muut 1/3 paitsi tablettinäyte 1/10)
Laimennetut näytteet suodatetaan ruiskusuodattimella
Suodatetut analyysipullot nimetään huolellisesti
Valmistetaan standardinäytteet
Valmistetaan ASA:sta 10mg/ml kantaliuos etanoliin
Kantaliuoksesta tehdään laimennokset 10ml:n mittapulloihin niin, että standardinäytteiden pitoisuudet ovat välillä 100-500mg/ml
Näytteet suodatetaan ruiskusuodattimella analyysipulloihin, jotka nimetään huolellisesti
Tulosten laskeminen
Standardinäytteiden pinta-aloista ja pitoisuuksista laaditaan kalibraatiosuora
Suoran ja näytteiden pinta-alojen avulla lasketaan näytteiden pitoisuudet
Laskuissa huomioidaan näytteiden laimennossuhteet.
Pitoisuudet lasketaan myös %-pitoisuuksina (m/m)
Virhelähteet
Laskuvirheet
Laskettu näytteiden massat väärin
Laskettu väärin tarvittava tablettijauhemassa
Laskettu laimennokseen tarvittava tilavuus väärin
Tuloksien laskemisessa ei huomioitu näytteiden laimennosta
Esim. Tablettinäytteessä pitoisuus tuli kertoa kymmenellä
Tablettinäytteen pitoisuutta laskiessa ei ole huomioitu, että ASA:n massa on eri kuin tabletin massa
Näytteiden tarkkaa massaa ei ole kirjattu ylös
Ei ole arvoa, johon verrata tulosta
Virheet suodattamisessa
Ylimääräisten partikkelien pääsy liuoksiin
Suodattamisen tekeminen väärässä järjestyksessä
Ruiskusuodattimen huuhtomatta jättäminen eri näytteiden välissä
Analyyttimolekyylien absorboituminen membraanikalvoon (jos ASA ei ole liuenneessa muodossa)
Virheet standardinäytteiden valmistuksessa
Virheellinen kalibraatiosuora, väärät pitoisuudet näytteille
HPLC
Liikkuvassa faasissa ilmaa
Ilmakuplat voivat aiheuttaa ongelmia pumpun ja detektorin toiminnassa
Kiinteät partikkelit (epäpuhtaudet)
Haittaavat pumpun toimintaa
Laitteisto voi mennä tukkoon
Pumppujen toiminnassa häiriö: liikkuvaan faasin virtauksen pulssiintumiseen, virtausnopeuksen häiriö
Muutoksia retentioaikoihin
Liikkuvan faasin pH:n muutokset
Ionioitumine (vaikuttaa retentioon)
Näytteen esikäsittely (ruiskusuodatus)
Pyritään poistamaan liuosmuotoisesta näytteestä kiinteitä partikkeleita
Erottelu perustuu hiukkasten kokoon
Liuos ajetaan polymeerimembraanin läpi kertakäyttöruiskulla
Membraani valitaan liuottimen perusteella (vesi vai orgaaninen liuos)
Ruiskusuodatusta käytetään näytteiden viimeiseen suodattamiseen ennen HPLC-laitteistoon syöttämistä
Estää laitteiston tukkeutumisen