Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
2.2 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä UV-Vis …
2.2 Lääkeaineen pitoisuuden määrittäminen näytteessä UV-Vis -spektrofotometrisesti
Koeasetelma
Alku- ja loppukonsentraationäytteiden valmistus
Kalibraationäytteiden tekeminen:
-> kantaliuoksen valmistus: liuotetaan 0,045 g natriumbentsoaattia 50 ml fosfaattipuskuria* -> välilaimennos 1/5 10 ml mittapulloon
-> standardiliuosten valmistus taulukkoon laskettujen arvojen mukaisesti (Lambert-Beerin laki, absorbanssialue 0,2-0,8 ja molaarinen absorptiviteettikerroin (7900 l/mol×cm))
Absorbanssimittaus näytteille Uv-Vis spektrofotometrillä aallonpituudella 229 nm
Kalibraatiosuoran laatiminen absorbanssimittausten pohjalta (x-akselilla pitoisuus mol/l, y-akselilla absorbanssi) -> suoran yhtälö -> ratkaistaan näytteiden pitoisuudet sijoittamalla niiden absorbanssit yhtälöön
Menetelmän perusteet
Uv-Vis perustuu molekyylin kykyyn absorboida sähkömagneettisen spektrin ultravioletti- ja/tai näkyvän aallonpituuden säteilyä -> kromoforit (aromaattiset renkaat, karbonyyliryhmät ja konjugoituneet kaksoissidokset) -> elektronit virittyvät korkeammalle energiatasolle -> valo absorboituu näytteeseen -> detektori mittaa valon intensiteetin jota verrataan valonlähteen intensiteettiin
valonlähde -> prisma -> näyte -> detektori
Standardinäytteiden pitoisuuden määrittäminen perustuu Lambert-Beerin lakiin A = ε·c·l
Merkitys lääkeanalytiikassa
Lääkeaineiden, apuaineiden, hajoamistuotteiden tai metaboliittien pitoisuuden määrittäminen
Virhelähteet
Natriumbentsoaatin epätarkka punnitseminen tai jääminen punnitusalustaan
Analyysivaa`an kalibraatio ei kunnossa
Natriumbentsoaatti ei ole liuennut kunnolla kyllästettyyn fosfaattipuskuriin (esim. huolimaton sekoittaminen, liuotus 50 ml vaikka pitäisi ensin liuottaa pieneen määrään)
Pipetointivirheet välilaimennosta tai standardiliuoksia tehtäessä
Laskuvirheet: Kantaliuoksen tai välilaimennoksen pitoisuudet laskettu väärin, laskuissa käytetty epätarkkoja punnitustuloksia, arvot sijoitettu väärin Lambert-Beerin kaavaan, väärien absorbanssiarvojen tai absorptivitettikertoimen käyttö, yksikkömuunnosvirheet (esim. mol/l -> mg/ml), unohdetaan ottaa huomioon automaattipipettien askelvälit, jolloin ei saada standardiliuoksen todellista pitoisuutta, pyöristysvirheet, standardien välilaimennosmäärä laskettu väärin, arvojen merkitseminen väärin taulukkoon)
Standardinäytteiden epähuolellinen sekoittaminen
Standardinäytteet merkattu epähuolellisesti
Väärän aallonpituuden käyttö absorbanssimittauksessa (pitää olla maksimiabsorbanssi -> mahdollisimman toistettavat ja herkät analyysit)
Nollanäytteen aallonpituusmittaus unohdetaan -> näytekyvetistä ja näytematriisista heijastuneen säteilyn intensiteetti ei nollaudu
Kyvettiä käsitellään huolimattomasti (sormenjäljet yms)
Kyvetti asetetaan väärin päin spektrofotometriin
Standardinäytteet mitataan väärässä järjestyksessä
Kyvettiä ei huuhdella mittausten välissä seuraavaksi mitattavalla liuoksella
Kyvettiä ei huuhdella fosfaattipuskurilla* ja seuraavaksi mitattavalla liuoksella väkevimmän standardinäytteen ja uuttonäytteiden välissä
Absorbanssiarvot merkitään väärin muistiinpanoihin
Arvojen syöttäminen väärin exceliin -> kalibraatiosuora vääristyy