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préparation d'échantillon protétique (filtration (utilisé fréquemment…
préparation d'échantillon protétique
filtration
utilisé fréquemment pour
stérilisation
élimination/isolement précipité
concentration de solutés
élimination de sels
microfiltration
diamètre pores
0,1 à 10 µm
permet la rétention de
particules en suspension
bactéries
Ultrafiltration
diamètre pores
1 à 100 nm
laissent passer les petites molécules (eau/ sels)
arrêtent molécules de masse molaires élevées (polymères/protéines colloïdes)
Nanofiltration
séparation de composant ayant une taille en solution voisines de celle du nm
retiens les sels ionisés
0,01 à 0,001 µm
Dialyse
objectif
éliminer petites molécules
échanger le tampon de solubilisation
diffusion selon
membrane perméable / semi-perméable
gradient de concentration
chaque espèces chimique e n solution subit individuellement ce processus
A l'équilibre les concentrations de chaque espèces diffusible seront égales de part en part
lyophilisation
objectifs
concentration d'un échantillon
conservation
déshydratation d'un produit préalablement congelé par sublimation
Précipitation
objectifs
Concentration d'un échantillon (protéique)
élimination des sels
deux types
Précipitation totale
par solvant organique
acide trichloroacétique
acétone
éthanol
le pouvoir de l'eau de solubiliser une macromolécule chargée décroit avec la concentration du solvant organique dans la solution
Etat natif protéines
grp latéraux chargés
dirigés vers l'extérieux
aa hydrophobe vers intérieur
Etat dénaturé
brise organisation
ramène à la surface grp hydrophobes
agrégation des prot avec les grp hydrophobes des autres prot
inconvénients
approche incompatible si on veut prot intacte et fonctionnelle
protéine difficile à redissoudre
précipitation douce / différentielle
par les sels
sulfate d'ammonium
force ionique à deux effet sur solubilité prot
faible concentration saline
neutraliser certaines charges ioniques requises en surface
interaction entre régions hydrophiles des protéines
augmentation de la solubilité
SALTING IN
forte concentration saline
compétition avec les protéines pour les molécules d'eau disponible en solution
précipitation
SALTING OUT