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Homogénéisation (caractéristiques (Membrane plasmique/paroi rompu, force…
Homogénéisation
caractéristiques
Membrane plasmique/paroi rompu
force mécanique exercée : cisaillement
étape initiale à bcp de procédures expérimentales en bioch
se fait dans un milieu liquide
résultat: homogénat
Dounce
Kit de broyage entièrement en verre
cylindre avec réservoir
mortier
pilons à boules
distance paroi/cylindre
inférieur à 0,1mm
plusieurs cycle des compression
travaillé à 4°C
bac de glace
environ 10 allers retours
Choc osmotique
peu utilisaer
rendement moins bon
combiner avec d'autre méthode
Biser certaines cellules fragiles avec min de dommage
solution hypo-osmotique
eau entre dans la cell
rupture membrane plasmique
Tampon d'homogénéisation
permettre stabilité organites + molécules
tonicité: isotonique (150 mM NACl)
pH physiologique :7,4
Température: 4°C (limiter activité enzymatique + maintenir propriété/ structures molécules)
présence d'anti-protéases
aprotinine
macroglobuline
PMSF
leupetine
EDTA
EGTA
Potter-eveljhem
Tube en verre
pilon en Teflon (PTFE) avec tige en acier inoxydable
Dounce mais couplé à un moteur
mouvements de rotation /compression
plus de force de cisaillement
convient aux tissus très fibreux comme foie, muscles
ULTRA TURRAX Tube Drive
système de
dispersion
agitation
homogénéisation
broyage
tube à échantillons jetables
protection et sécurité pour
échantillons infectieux
substances toxiques
substance à odeurs fortes
controle des conditions temps/energie/volume
sonication
destruction des cell par ultrasons
tige de métal "sonicateur" introduite dans la suspension cell
ultrasons
ondes dans fluide
cycles haute/basse pression
bulles de vides
cavitation
utilisation fréquente pour extraction de prot
Cycles de congélations / Décongélations
T:-20°C
intégrité des structures membranaire pas préservé
organites endommagés
Ball bearing cell cracker
suspension de cell forcée par des seringues attachées à travers un alésage contenant une bille d'acier
nettoyage difficile donc plus tellement utiliser
French Press
Cellules sous forte pression
ouverture de la valve
depression
éclatement cellules
force de cisaillement quand les cellules passent
Seringue
plusieurs allers-retours à l'aide de la seringue en utilisant une aiguille fine