Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Introduction (Chromatography (Separation mechanism (absortion…

- - - - Stationary Phase (SP)
      - Mobile Phase (MP)
  - - - 1.paper Chromatography
        
        SP : paper
        
        ต้องมี filter paper : กระดาษกรองเพื่อให้มั่นใจว่า solvent มีการกระจายทั่วถึง
      - Thin Layer Chromatography : TLC
        
        SP : Glass/Al/Plastic coat with SP
        
        preparation
        
        2.activation
        
        ต่างกับ paper ที่มีตัว support เป็นแก้ว แล้วโค้ดด้วย SP ก่อนใช้งานต้อง มีการactivation ทำให้สารเคลือบที่แห้งกลับมาใช้งานได้
        
        3.Preconditioning
        
        Pre washing
        
        2&3 ก่อนใช้งาน
        
        ส่วนประกอบ
        
        support
        
        ทำจากแก้ว กระจก Al
        
        SP
        
        Additive
        
        selection of SP
        
        Size
        
        Detection
        
        Type
        
        Polar Phase
        
        1.Si : มักใช้ Si เป็นแบบ adsorption
        
        F254 : short wavelenght
        
        3 more items...
        
        F365 : long wavelength
        
        3 more items...
        
        เกิด interaction ได้หลาบแบบ
        
        1 more item...
        
        modified Si gel
        
        1 more item...
        
        ส่วนใหญ่ MP : nonpolar
        
        ex hexene, methanol
        
        2.Alumina
        
        cellulose
        
        polyamide
        
        Nonpolar Phase
        
        แยกสารได้ขึ้นกับ
        
        interaction of analyte
        
        MP
        
        ต้องรู้สัดส่วนที่ใช้ : MP ratio และ order of mixing
        
        Polarity index
        
        Volume
        
        usage : Quanlitation > : เป็นกาาตรวจหาเอกลักษณ์มากกว่า
        
        developing Chamber
        
        Twin trough chamber
        
        ข้อดี : ใช้ solvent น้อย ใช้ในการ pre-equlibrate(ทำให้plateอิ่มตัว) ได้
        
        Sample application
        
        manual
        
        capillary tube : จุ่มสารแล้วจิ้มspotบน TLC
        
        semi-automatic sampler
        
        auto sampler (HPTLC)
        
        ใช้เครื่องทั้งหมด
        
        analyse
        
        volume : ใช้มากเห็นผลชัดขึ้น
        
        2.Type
        
        Spot
        
        streak
        
        conc : เข้มข้นมากกว่าเห็นการแยกของสีสารชัดกว่า
        
        visualization
        
        non-chemical : UV
        
        Type of record
        
        drawing
        
        recorder : TLC chromatogram
        
        3.densitometer : วัดความเข้มของสีแล้วแปลงเป็น chromatogram
        
        data interpretation
        
        Retardation factor (Rf) = distance solute move/ distance solvent move
        
        ใน condition เดียวกันของสาร 2 ตัว มีค่า Rf ใกล้เคียงกัน เป็นสารประเภทเดียวกัน
        
        Relative Rf = distance of sample move/ distance ref. standard move
        
        เป็นการเปรียบเทียมของสารตัวอย่างและสารมาตรฐาน
        
        ถ้าสารตัวเดียวกันจะมีค่า Relative Rf = 1
        
        development of TLC plate
        
        one dimension development
        
        two dimension development
        
        system suitability
        
        resolution of the spot or bands
        
        อย่านผลได้ดีควรมี spot ไม่ติดกัน
        
        position
        
        3.color
      - High performance thin Layer Chromatography : HPTLC
  - - - Interaction liquid Chromatography
    - - แยก enantiomer
  - - - สารไปเกาะบน SP แล้วสามารถแยกออกมาจากของผสมได้
      - มี SP : Solid
      - for solid-liquid or solid-gas Chromatography
      - เกี่ยวข้องกับ physical attachment
        
        เป็นโมเลกุลที่ไป interaction : ไปเกาะที่ SP
      - ex : Ka<Kb สาร b ชอบอยู่ใน SP มากกว่าสาร a
    - - มีสารละลายอยู่ในของเหลวผสมนั้นมากกว่าอีรกประเภทนึง เสมือนแขวนลอยอยู่
      - เป็นการแยกของสารที่ขึ้นอยู่กับสารละลายของสารที่ไม่เท่ากัน
      - สารที่อยู่ในของผสมจะมีการเคบื่อนที่กลับไปกลับมาใน SP และ MP
      - Partition coefficient :K = ความเข้มข้นของสารในSP/ความเข้มข้นของสารใน MP
    - - แยก base on ประจุของสาร
    - - Specific binding lock and key
        
        ex: Ab-Ag
    - - ใน โมเลกุลที่แตกต่างกันจะผ่าน SP ได้ไม่เท่ากัน
- - - - ดูเครื่องมือและการวิเคราะห์
  - - - Ex: -ถ้าสารมีขั้วเหมือนในSP ก็จะเคบื่อนที่ในคอลลัมได้ช้า เพราะมีแรงดึงดูดของสารที่ขั้วกับสารที่มีชั้วใน SP
        -ถ้าสารมีขั้วเหมือนใน MP ก็จะทำให้สารเคบื่อนที่ออกจากคอลลัมได้ไว
- - - - high D : high retention & separation
    - - 1.film thickness
        
        หนาเพิ่ม ระยะห่างระหว่าง chromatogram ห่างมากขึ้น
        
        ลด film thickness
        
        เพิ่ม Sharper peak
        
        ลด resolution
        
        ลด column bleed
        
        การทำให้ baselind สุงขึ้น
        
        retentiontime สั้นลง
      - 2.inner diameter : ID
      - 3.length
      - 4.polarity
  - - - มี 3 ตัว
        
        He
        
        นิยมสุด
        
        แพง
        
        2.H2
        
        อยากได้ Flow rate เร็ว
        
        MS detector
        
        เกิด noise มาก กระทบการแปลผล
        
        N2
        
        slow gas
        
        FR ช้าสุด
        
        อาจทำให้การแยกดีขึ้น
        
        ถูกสุด
      - optimum flow rate : H2 > He > N2
      - การเลือก carrier gas ขึ้นกับ
        
        detector
        
        2.desired separation
    - - Gas temp
      - Gas Flow rate :star:
- - - - ฉีดสารตัวอย่างเข้าไปหมดทีเดียว
    - - ค่อยๆฉีด ไม่ใส่ทีเดียวหมด
    - - headspace
- - - - coated inner wall
      - also called : Open Tubular (OT)
      - มี Flow resis น้อยกว่า
      - longer and narrower than packed column
      - มี high plated count
      - high eff
      - ส่วนประกอบ
        
        polymer coating
        
        fused Si
        
        typical liquid phase : SP
- - - - or http://s21507.pcdn.co/wp-content/uploads/2013/11/Mobile-phase-diagram-wid-polar-n-non-polar-ends.jpg
      - จะได้ MP : ionic end and a hydrophobic tail
      - เรียกว่า ion pair
        
        หลักการ
        
        nonpolar จะไปฝั่งตัวเองกับ SP และส่วนที่เป็น polar จะไปจับกับโมเลกุลที่ แตกตัวได้
        
        ปกติ SP จะเป็น nonpolar ทำให้โมเลกุลที่แตกตัว(ในสารวิเคราะห์)ออกมาเร็วมาก
      - ex : Sodium hexane sulfonate
    - - สามารถวิเคราะห์สารที่เป็นได้ทั้ง + และ - ทำให้ peak มีรูปร่างแบบสมมาตร เพราะสารทั้แตกตัวได้บางส่วนออกช้าเร็วไม่เท่ากันจนเกิดหางของพีค
        
        reagentประจุลบจับกับประจุบวกของสารที่เป็นเบสได้
        
        reagentประจุบวกจับกับประจุบวกของสารที่เป็นกรดได้
- - - - ควรทำความสะอาดหลังใช้
      - ควรมี guard column
  - - - totally porous particle รูพรุนทั้งหมด
      - core-shell particle รู้พรุนที่มีแกนกลาง(ไม่พรุน)
      - บริเวณที่มีรูพรุนจะเกิดการแยกกันของสาร
    - - ส่งผลในการแยกที่เวลาไม่เท่ากัน แยกได้พีคแตกต่างกัน
    - - carbon load สูง : non-polar มาก
    - - Si ที่อยู่ในคอลลัมไม่มีอะไรต่อ และยังมี lone pair เหลืออยู่ทำให้ตอนแยกสารมันสามารถไปจับกับสารอื่นได้
      - เป็น error pack :!:
- - - - ใช้ ratio เดียว เก็บสารเดียว
      - ข้อเสีย : ถ้ายังใช้สัดส่วนเดิม จะมีสารบางส่วนไม่แยกออกมา
    - - ปรับสัดส่วนให้เหมาะสมกับการแยกของสารที่มี dilution ต่างกัน
  - - - เป็นเครื่องมือที่ให้แรงดันกับ MP ให้ผ่าน SP ได้
      - เกิด const. FLow rate
      - ช่วยปรับสัดส่วนของ solvent ว่าใช้เท่าไหร่ในการแยกสาร
      - มี 2 แบบ
        
        Piston pump
        
        single Piston pump : จะได้ Flow เป็นจังหวะ
        
        Dual Piston pump : continual flow
        
        check valve
      - การผสมสารในเครื่องปั๊มมี 2 แบบ
        
        Quaternary Pump : การผสมแบบใช้ Low Pressure
        
        binary Pump : การผสมแบบใช้ High Pressure
  - - - E^0 of Normal Phase (มีSP เป็นpolar) : high polar -> high E^0
      - E^0 of Reverse Phase (มีSP เป็นnonpolar) : high polar -> low E^0
      - ผลของ E^0
        
        E^0 มาก : ชะสารออกมาได้ดี แยกไม่ได้
        
        E^0 น้อย : สารไม่ค่อยออกมากับ MP
        
        ต้องปรับให้เหมาะสม ขึ้นกับ retension time
      - ขึ้นกับ
        
        SP
        
        MP
        
        3.pH
        
        Temperature
        
        structure ของสารที่วิเคราะห์
  - - - เป็นการเอาฟองอากาศที่จะไปอุดตามปั๊มออก ทำให้มี flow rate ดีขึ้น ฟองไม่ไปอุดตามpump
      - มี 2 แบบ
        
        ultrasonic bath
        
        HPLC system:เป็นตัวที่ใช้ใน HPLC :check:
    - - เป็นตัวกรองภายใน HPLC เป็นลักษณะข้อเล็กๆ ถ้ามีอะไรไปอุดก็จะตันได้ จึงต้องมีตัวกรองก่อนมีขนาดประมาณ 0.22 micrometer
      - ex : nylon, teflon, cellulose acetate
- - - - สามารถ detect คุณสมบัติทั่วไปของสารได้ทุกสาร
        
        เช่น Refractive detector, evaporating light scattering detector
    - - จะเจาะจงเฉพาะกับคุณสมบัติของ compound เท่านั้น
      - เช่น Absorbance detector(UV, photodiode array เฉพาะสารที่มี chromoform หรือดูดกลืนแสงได้), fluorescence detector(เฉพาะสารที่เรืองแสงได้)
- - - - ใช้กับสารที่ต้องรู้คุณสมบัติของตัวยาและตัววิเคราะห์
    - - เป็นการทดสอบว่าวิธีวิเคราะห์แบบนี้ใช้กับสารนี้ได้หรือไม่
  - - - tR = length/Rate
      - reletive tR = St. Rt/sample RT
    - - Qualitation : ใช้ Rt
      - Quatitative : เป็นการหาปริมาตร ปัจจัยในการคำนวณคือ
        
        peak height
        
        2.Peak area
    - - ถ้าไม่ดีจะทำให้การวิเคราห์พลาดไป เช่น สารตัวเดียวกันได้ peak area ไม่เท่ากัน
      - เกิด noise มาก วิเคราะห์สารผิด ผลที่ได้ไม่น่าเชื่อถือ
    - - ใน chromatogram การแยกพีคของสารแต่ละตัวจะเกิดภายใต้สมดุล คือมีลักษณะไปๆมาๆ
      - band broadening ความกว้างหนาของสารที่แยกอยู่ในคอลลัมขึ้นอยู่กับการเคลื่อนที่ของโมเลกุลที่แตกต่างกัน
      - ช่วงแรกสารที่แยกออกมาจากของผสมจะมีความหนาแน่นของโมเลกุลน้อยจนมากขึ้นๆ และน้อยลงตามการเคลื่อนของโมเลกุลที่มีคุณสมบัติเหมือนกัน
      - แต่ถ้าโมเลกุลของสารเคลื่อนที่ออกจากคอลลัมไม่เท่ากันจะได้กราฟที่เบ้
    - - 1.Sharp Peak
      - 2.Separate peak
      - 3.same substance same time & condition
    - - tailing
      - fronting : พุง
  - - - เก่าแล้ว
      - จะแบ่งเป็น plate ย่อยๆใน column มากมาย : N(theoretical plates)
      - N = L(ความยาวคอลัม)/H(plate height) = (16t)^2/w(peak widh)^2
      - ideal : แคบ,แหลมสูง,สมมาตร
      - ถ้า N มาก มีประสิทธิภาพดี แปลว่ามีความยาวคอลลัมมาก
      - H น้อย ได้พีคที่แหลม, ทำให้ chromatogram มีประสิทธิภาพมากขึ้น
      - H=σ^2/L ,σคือSDวัดจากกึ่งกลางพีคจนขอบเส้นกราฟ L คือระยะทางที่สารเคบื่อนที่ไป
      - symmetry factor : As = W0.05/2f , W: ความกว้างฐานจากฝั่งนึงไปอีกฝั่ง
        
        As>1 : มีหาง
        
        As =1 สมมาตร
    - - van deemter's equation
        
        ใช้กับ TLC HPLC
        
        ใช้ดูว่าระบบเหมาะกับการใช้ และควรปรับตัวแปรไหน
        
        Longitudinal diffusion : B คือการแพร่กระจายของโมเลกุล
        
        สูงๆ : กราฟ shape น้อยลง
        
        ต่ำๆ : กราฟจะแหลม
        
        1.A : eddy diffusion การแพ๊กกันของโมเลกุลในคอลัม มีผลต่อการเดินทางของสารที่อยู่ในของผสม
        
        Mass transfer
        
        การเคลื่อนที่ระหว่างเฟส SP & MP
        
        ถ้าสารชอบ MP ก็จะออกจากคอลัมไว
        
        ถ้าสารชอบ SP ก็จะชอบช้อปปิ้งวนอยู่ในคอลลัม : ออกจากคอลัมช้า
        
        C : Resistance to mass transfer
      - เมื่อนำไปพล๊อตกราฟจะได้ Plate Height ที่ต่ำสุด : มีประสิทธิภาพเพิ่มขึ้น
    - - ความสามารถในการแยกสารที่มีความแตกต่างของ retention, ดูว่าใครแยกดีกว่าใคร
      - α = k2/k1
    - - การดูว่าพีคแยกออกจากกันมัีย
      - Rs > 1 : ดี พีคแยกออกจากกัน
      - the purnell equation
        
        ความสัมพันธ์กันของcapacity factor (k') ,selectivity, efficiency
        
        ดูว่าส่งผลอะไรกับ Rs
    - - S/N ratio = 2H/h
      - ดูความไวของการทดสอบ
    - - สารที่แยกออกจากกันไม่ได้
- - - - UV
      - ได้ออกมาเป็น chromatogram
  - - - SP : polar ex : Si
      - MP : Non-polar ex : Hexane
    - - SP : non-polar เช่น น้ำมันเคบือบผิว Si
      - MP : Non-polar
      - มักใช้ทดสอบสารไม่มีขั้ว
    - - SP : ion exchange (fixed charge)
        
        cation exchanger : -SO3- , -CO2-
        
        แลกกับประจุบวกเพราะตัวมันเป็นลบ :
        
        Anion exchanger : -NR3+ (quaternary ammonium)
        
        แลกกับประจุลบเพราะตัวมันเป็นบวก
        
        Matrix : Resin (Polysyrene) or Gel
      - MP : buffer solution of different pH
      - Application : Amino acids, Protein/peptide
        
        Isoelectric
        
        High pH : - charge, Anion exchanger
        
        Low pH: + charge, Cation exchanger
      - affinity of ion exchanger : สารที่มีประจุ +3 > +2 > +1