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Electrophorese (électrophorèse "SDS-Page" (différentes étapes:…
Electrophorese
électrophorèse "SDS-Page"
vitesse migration dépend
taille sous-unité
degré de réticulation du gel
la plus utilisée
Procédé permettant de séparer des protéines en mélange placées dans un champ électrique
différentes étapes:
1: Extraction/préparation des échantillons protéiques à séparer
2: Solubilisation/ dénaturation des protéines
SDS
détergent anionique
rompt les structures 2nd/3thr prot en dépliant
enveloppe protéines avec charges -
forte charge - apportée par SDS masque la charge intrinsèque de la protéine
rapport charge/masse même pour tte prot
séparation dep uniquement poids moléculaire
3:Préparation du gel d'acrylamide
matrice
support physique échantillon migration protéines
montage
verticale
matrice placée entre 2 plaques
forme liquide
polymérise en gel
4: Séparation des protéines déposées sur le gel placé dans un champ électrique
5: Révélation des protéines par coloration (visualisation)
Caractéristiques
Séparation de solutés chargés par migration dans un champ électrique
migration dépend :
charge protéine
taille
support
gel plus ou moins réticulé
focalisation isoélectrique
électrophorèse dans gradient de pH
migration dépend uniquement pHi