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Genfunktions-Analyse (Reverse Genetik (Gen wird gezielt mutiert -->…
Genfunktions-Analyse
Reverse Genetik
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c) De- und Aktivierung Gen in best. Gewebe (Transgen mit bakt. cis-regulatory Seq. vor Gen X; ein und aus durch Zugabe/Inhibieren des Transkriptionsaktivators)
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Transgen muss mit Genom rekombinieren --> durch Homologe Rekombination --> Wt durch Transgen ersetzt
Bsp. Knock-Out Maus
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über PCR getestet, welche Zellen Wt durch Transgen durch HR ersetzt haben; in 1 Allel
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Klassische Genetik
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Epistasie Analyse
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indem ich mir Mutante A, B und AB ansehe
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Mutagense:
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c) Insertional Mutagenesis (exogene DNA inseriert ins Genom; zb Transposables E.) (identifiziert über PCR )
RNA-Interferenz
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zB. C. elegans: isst E. coli, das dsRNA exprimiert
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CRISPR/Cas9
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Guide RNA: hat Cas9-Bindeseq. und designte Sequenz, um an Targetgen zu binden (in ES exprimiert)
b) mutante Form von Cas9: keine Nukleasefunktion; fusioniert mit Transkriptions-Aktivator/Repressor --> Aktivierung, Deaktivierung
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Polymorphismus
2 Sequenzvarianten, die coexistieren
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Haplotype Blocks
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= Kombinationen von Polym., die als Einheit vererbt werden
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