Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Miniature scanning light-sheet illumination implemented in a conventional…
Miniature scanning light-sheet illumination implemented in a conventional microscope
在傳統顯微鏡中實現的微型掃描光片照明
結果和討論
掃描3D高斯光束研究關於
對比度
3D影像
均在積分時間期間形成光片
agarose + 190nm fluorence beam
光片在y軸上以300pm的不走移動通過樣品
透過三種成像模式，
detection
scanned light-sheet with wide-field detection
wide-field illumination
儘管樣品是高度散射的，
但碘化丙錠染色的細胞型狀和細胞核是可見的
Fig 6a
顯示同心環的特徵=>這是Bessel 光束的特徵
FWHM:
line confocal<non-line confocal
摘要
活細胞是一個高度動態系統，可以利用以下方式進行控制
螢光顯微鏡進行的活細胞研究通常受到以下限制:
空間解析度
時間解析度
光漂白
設計了一種微型 light sheet 系統，
架構: 1. 傳統的倒置顯微鏡
2. 光學調諧器 3. 干涉追蹤器 => 捕獲活體巨噬細胞的3D圖像
結果
axial resolution: 0.8micro meter
10~15倍的圖像對比度
掃描
橫向和軸向(Gaussian and Bessel beams)，利用電子可調透鏡進行快速的聚焦
介紹
當10^5~10^6激發，會造成 "光漂白" =>結束
light-sheet:
可以顯著減少光漂白，
"因為只有焦平面的螢光團
被激發"
對於掃描3D物體而言，
因為它是"線"的掃描，
所以比點掃描還快。
Light-sheet:
SPIM
HILO
3.iSPIM
4.RLSM
5.LSBM
6.soSPIM
7.SCAPE
8.OPM
light-sheet + optical tweezer
inverted microscopy(倒置顯微鏡)
適合:
光學捕捉
跟蹤
提出了一種 "微型的light-sheet":
適用於多數 倒置顯微鏡
1.1設置
高NA物鏡*2: 距離小於2mm
細胞至於樣品架內的蓋玻片上，在水溶液或透明凝膠中
高度聚焦的激光束(NIR)通過模具捕獲物鏡形成，用於直徑0.5-3micro meter的珠子3D光學捕捉器
1.2光學架構
照明路徑:
可以以最小變化對高斯和Bessel照明進行調整。
材料和方法
考慮到PFM的空間限制，使用CAD設計鏡子精確放置的位置
固定部分
3個螺紋孔與V型槽對齊
使用黏合劑將微型鏡子黏到第三部分末端
可移動部分
有3個部分，讓鏡子可以移動各種角度
第一部分
3個v-groves的固定鋁孔
第二部分
由黃銅做成的V-groves的兩側
靠彈簧推動
第三部分
將微型鏡子黏在末端
這種布置有六個自由度
需要校準時間
鏡子的製作
通過在水中自由浮動的熒光珠成像來進行設置的初始校準。
(調整鏡子的角度以獲得清晰影像)
image capture
rolling shutter mode of camera
line confocal
slit width 4 pixels
non-line confocal
400 pixels
3D image stacks(scanning in y-direction)
1.2NA物鏡
可調透鏡
relay lens*2
圖像疊加深度20 mico
EX: 491nm
染劑: LifeAct GFP
對象: 巨噬細胞(macrophages)
整理 和 討論
微小light-sheet系統
結合
反向的高NA光學顯微鏡
:
光學鑷子
scan volume was about ΔxΔyΔz ≈100 μm × 50 μm × 60 μm
設計動機
我們的設計動機是避免蓋玻片上的細胞移位
記錄，以實現光學鑷子的同步實驗。
常數或是明確的捕獲焦點，必須將捕獲的粒子明確的定義位置在細胞周圍
優點
不是移動樣品，
是移動上下掃描的light-sheet
透過ETL將light-sheet發出的螢光重新聚焦在相機上
photonic force microscopy(PSF)
光子力顯微鏡
是一種基於光學鑷子的顯微鏡技術。
透過小的激光束保持小的介電粒子
