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Cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC) - Coggle Diagram
Cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC)
Emplea presiones elevadas para forzar el paso del disolvente por una columna que contiene particulas muy finas
Sistema de suministro de fase móvil
Impele la fase móvil al flujo seleccionado dotándola de la presión necesaria para atravesar la columna y el resto del sistema
1) Debe ser capaz de gestionar altas presiones. 2) Mantener el flujo libre de pulsos. 3) proporcionar caudales constantes y reproducibles 4) Permitir cambios de disolvente de modo simple y rápido 5) Ser químicamente inerte y resistente a la corrosión
Materiales de construcción y su compatibilidad con disolventes
Completamente resistentes (Teflón, Rubí, Zafiro, Cerámica, Tefzel, Kalrez, Fluoraz
Resistencia limitada(Acero inoxidable 316 - cloruros acuosos ácidos, PEEK - ácidos nítrico y sulfúrico concentrados, Kel-F - disoluciones de THF e hidrocarburos halogenados, Acetal - ácidos o bases fuertes)
Tipos de bombas
Bombas recíprocas
Pequeña cámara, impulsada por un pistón accionado por motor. La entrada y salida se regulan con dos válvulas antirretorno
Bombas de pistón
Un dispositivo electrico actua sobre el piston que puede ser sencillo o doble, el flujo depende de la frecuencia
Bombas tipo jeringa
Ideales para columnas pequeñas con volumens de 250 a 500 mL. Operan mediante un tornilloconductor y la velocidad se controla cambiando el voltaje del motor
Bombas peristálticas
Ideal para productos abrasivos, corrosivos y viscosos. De fácil mantenimiento, con menos riesgo de contaminación y con un proceso automatizado y eficiente
Bombas peristálticas de alta presión (bombas manguera)
Bombas peristálticas de baja presión (bombas de tubo)
Sistema de inyección de muestra
Dispositivos por el que se introduce la muestra, en la fase móvil o en el lecho cromatográfico. Se encuentran interpuestos entre las salida de la bomba y la columna.
Tipos de inyectores
Inyectores manuales
Inyectores de jeringa
Se realiza por medio de un jeringa, cuya aguja entra a través del septum, permitiendo el deposito de la muestra en la columna
Inyectores de válvula o bucle
Consiste en una válvula de seis vías, dos de ellas conectadas entre sí por un tubo loop
Inyectores automáticos
Robots de procesado de muestras donde pueden disponerse múltiples viales o tubos de muestra.
Una aguja cae sobre los viales para perforarlos y succionar la muestra
Existen tres tipos. Bucle, línea de transferencia y bucle con línea de transferencia
Microjeringas
Cilindro de vidrio calibrado con embolo metálico
Tipos de microjeringas
Compacta
Estándar (émbolo de acero inoxidable no intercambiable)
Estándar (émbolo protegido)
Estándar (émbolo protegido bajo costo)
Para gases y líquidos (émbolo con sello PTFE)
Para gases y líquidos (émbolo con sello PTFE, émbolo protegido)
Con volúmen contenido en la aguja
Tipos de puntas para agujas
N, NR (aguja cementada, Rheodyne)
LTN (aguja punta Luer)
SN (aguja especial)
RN (aguja extraíble)
LT (Punta Luer)
KH (extremo moleteado)
C (ChemSeal)
TLL, TLLX (PTFE Cierre Luer)
AD (AccuDil)
DAD (Diluter AccuDil)
SL (SampleLock)
PTAS
PT2
PT3
1) Debe ser hermético 2) No provocar perdidas de presión o alterar el flujo de la bomba 3) No debe retrasar los tiempos de análisis 4)Ser de fácil manejo 5) Asegurar la reproducibilidad 6) Capaz de trabajar a presiones elevadas
Columnas
Hechas de tubería de acero inoxidable o tubería de vidrio o polímeros como polieteretercetona (PEEK)
Tipos de columnas
Analiticas
Longitud de 5 a 35 cm, diámetros internos de 3 a 5 mm, tamaño de partículas para empacamiento 3.5 a 10 micras
Partes
De acero inoxidable rellenas de una fase estacionaria. Con un diámetro de 2 a 60 mm, y una longitud de 5 a 30 com
Microcolumnas
Tienen un diámetro menor a 1 mm, disminuyen el flujo y volumen del solvente usado
Tipos de microcolumnas
Tubular abierto
Parcialmente empacadas
Fuertemente empacadas
Precolumnas
Ayudan a aumentar la vida útil de la columna, eliminando materia en suspensión y contaminantes
Tipos de precolumnas
De desperdicios
De protección
Detectores
Son sistemas encargados de poner en manifiesto la presencia de solutos que salen de la columna
1) Debe presentar sensibilidad adecuada 2) Respuesta líneal amplia 3) Respuesta rápida 4) Manejo sencillo
Tipos de detectores
Detector UV-Visible
Tiene mejor selectividad, alrededor de 10-8 g/mL. No es termosensible, con un precio relativamente bajo y sensible a compuestos orgánicos
Tipos de detector UV-Visible
Detector UV-Vis
Detector de serie de diodos
Detector infrarrojo
Los analitos absorben radiación infrarroja que se encuentra en un longitud de onda mayor a los 700 nm
Tipos de detectores infrarrojo
De detección continua off-line
De detección online
Detector de fluorescencia
Los solutos son capaces de emitir fluorescencia o son derivatizados para emitirla. Son muy sensibles, con un límite de detección de 0.001 a 0.01 ng
Detector de índice de refracción
Mide la variación en su índice de refracción como consecuencia de la presencia del soluto
Tipos de detectores de índice de refracción
Detector de desviación
Detector de reflexión (Fresnel)
Detector de dispersión de luz evaporativa
Responde a todos los solutos menos volátiles y su limite de detección es de 0.1 y 1 ng. Detecta a partir de la interacción de la radiación electromagnética con la materia
Detector electroquímico y detector amperometrico
Basado en la oxidación del analito eluido mediante un electrodo adecuado
Detector de conductividad
Mide la resistencia que ofrece la mezcla diluida, relacionada con su concentración.
Detector acoplado a espectrómetro de masas
Interfases
Termospray
APCI
Electrospray
Cromatogramas
Gráfico que representa la respuesta del detector en función del tiempo de elución
Partes de un cromatograma
Línea base
Pico
Base del pico
Área del pico
Máximo del pico
Altura del pico
Anchura del pico
Anchura del pico en la basa
Anchura de de pico a la midad de la altura
Cola
Mediciones
Coeficiente de distribución
Factor de capacidad
Usos
Cualitativo
Identificación de sustancias
Determinación de pureza
Cuantitativo
Determinacion del numero de componente de la mezcla
Concentración del analito separado
Tipos de cromatogramas
Cromatograma en papel o capa fina
Cromatograma generado por detectores
Cromatograma diferencial
Cromatograma integral
Parametros analiticos
Volumen muerto
Tiempo muerto
Volumen de retención
Tiempo de retención
Tiempo de retención ajustado
Retención relativa
Factor de capacidad
Asimetría
Resolución
Altura de plato
Número de platos