Cromatografía de líquidos de alta eficacia (HPLC)

Emplea presiones elevadas para forzar el paso del disolvente por una columna que contiene particulas muy finas

Sistema de suministro de fase móvil

Impele la fase móvil al flujo seleccionado dotándola de la presión necesaria para atravesar la columna y el resto del sistema

Sistema de inyección de muestra

Dispositivos por el que se introduce la muestra, en la fase móvil o en el lecho cromatográfico. Se encuentran interpuestos entre las salida de la bomba y la columna.

1) Debe ser capaz de gestionar altas presiones. 2) Mantener el flujo libre de pulsos. 3) proporcionar caudales constantes y reproducibles 4) Permitir cambios de disolvente de modo simple y rápido 5) Ser químicamente inerte y resistente a la corrosión

Materiales de construcción y su compatibilidad con disolventes

Completamente resistentes (Teflón, Rubí, Zafiro, Cerámica, Tefzel, Kalrez, Fluoraz

Resistencia limitada(Acero inoxidable 316 - cloruros acuosos ácidos, PEEK - ácidos nítrico y sulfúrico concentrados, Kel-F - disoluciones de THF e hidrocarburos halogenados, Acetal - ácidos o bases fuertes)

Tipos de bombas

Bombas recíprocas

Pequeña cámara, impulsada por un pistón accionado por motor. La entrada y salida se regulan con dos válvulas antirretorno

Bombas de pistón

Un dispositivo electrico actua sobre el piston que puede ser sencillo o doble, el flujo depende de la frecuencia

Bombas tipo jeringa

Ideales para columnas pequeñas con volumens de 250 a 500 mL. Operan mediante un tornilloconductor y la velocidad se controla cambiando el voltaje del motor

Bombas peristálticas

Ideal para productos abrasivos, corrosivos y viscosos. De fácil mantenimiento, con menos riesgo de contaminación y con un proceso automatizado y eficiente

Bombas peristálticas de alta presión (bombas manguera)

Bombas peristálticas de baja presión (bombas de tubo)

Tipos de inyectores

1) Debe ser hermético 2) No provocar perdidas de presión o alterar el flujo de la bomba 3) No debe retrasar los tiempos de análisis 4)Ser de fácil manejo 5) Asegurar la reproducibilidad 6) Capaz de trabajar a presiones elevadas

Inyectores manuales

Inyectores de jeringa

Se realiza por medio de un jeringa, cuya aguja entra a través del septum, permitiendo el deposito de la muestra en la columna

Inyectores de válvula o bucle

Consiste en una válvula de seis vías, dos de ellas conectadas entre sí por un tubo loop

Inyectores automáticos

Robots de procesado de muestras donde pueden disponerse múltiples viales o tubos de muestra.
Una aguja cae sobre los viales para perforarlos y succionar la muestra

Existen tres tipos. Bucle, línea de transferencia y bucle con línea de transferencia

Microjeringas

Cilindro de vidrio calibrado con embolo metálico

Tipos de microjeringas

Compacta

Estándar (émbolo de acero inoxidable no intercambiable)

Estándar (émbolo protegido)

Estándar (émbolo protegido bajo costo)

Para gases y líquidos (émbolo con sello PTFE)

Para gases y líquidos (émbolo con sello PTFE, émbolo protegido)

Con volúmen contenido en la aguja

Tipos de puntas para agujas

N, NR (aguja cementada, Rheodyne)

LTN (aguja punta Luer)

SN (aguja especial)

RN (aguja extraíble)

LT (Punta Luer)

KH (extremo moleteado)

C (ChemSeal)

TLL, TLLX (PTFE Cierre Luer)

AD (AccuDil)

DAD (Diluter AccuDil)

SL (SampleLock)

PTAS

PT2

PT3

Columnas

Hechas de tubería de acero inoxidable o tubería de vidrio o polímeros como polieteretercetona (PEEK)

Tipos de columnas

Analiticas

Longitud de 5 a 35 cm, diámetros internos de 3 a 5 mm, tamaño de partículas para empacamiento 3.5 a 10 micras

Partes

De acero inoxidable rellenas de una fase estacionaria. Con un diámetro de 2 a 60 mm, y una longitud de 5 a 30 com

Microcolumnas

Tienen un diámetro menor a 1 mm, disminuyen el flujo y volumen del solvente usado

Tipos de microcolumnas

Tubular abierto

Parcialmente empacadas

Fuertemente empacadas

Precolumnas

Ayudan a aumentar la vida útil de la columna, eliminando materia en suspensión y contaminantes

Tipos de precolumnas

De desperdicios

De protección

Detectores

Son sistemas encargados de poner en manifiesto la presencia de solutos que salen de la columna

1) Debe presentar sensibilidad adecuada 2) Respuesta líneal amplia 3) Respuesta rápida 4) Manejo sencillo

Tipos de detectores

Detector UV-Visible

Tiene mejor selectividad, alrededor de 10-8 g/mL. No es termosensible, con un precio relativamente bajo y sensible a compuestos orgánicos

Tipos de detector UV-Visible

Detector UV-Vis

Detector de serie de diodos

Detector infrarrojo

Los analitos absorben radiación infrarroja que se encuentra en un longitud de onda mayor a los 700 nm

Tipos de detectores infrarrojo

De detección continua off-line

De detección online

Detector de fluorescencia

Los solutos son capaces de emitir fluorescencia o son derivatizados para emitirla. Son muy sensibles, con un límite de detección de 0.001 a 0.01 ng

Detector de índice de refracción

Mide la variación en su índice de refracción como consecuencia de la presencia del soluto

Tipos de detectores de índice de refracción

Detector de desviación

Detector de reflexión (Fresnel)

Detector de dispersión de luz evaporativa

Responde a todos los solutos menos volátiles y su limite de detección es de 0.1 y 1 ng. Detecta a partir de la interacción de la radiación electromagnética con la materia

Detector electroquímico y detector amperometrico

Basado en la oxidación del analito eluido mediante un electrodo adecuado

Detector de conductividad

Mide la resistencia que ofrece la mezcla diluida, relacionada con su concentración.

Detector acoplado a espectrómetro de masas

Interfases

Termospray

APCI

Electrospray

Cromatogramas

Gráfico que representa la respuesta del detector en función del tiempo de elución

Partes de un cromatograma

Línea base

Pico

Base del pico

Área del pico

Máximo del pico

Altura del pico

Anchura del pico

Anchura del pico en la basa

Anchura de de pico a la midad de la altura

Cola

Mediciones

Coeficiente de distribución

Factor de capacidad

Usos

Cualitativo

Identificación de sustancias

Determinación de pureza

Cuantitativo

Determinacion del numero de componente de la mezcla

Concentración del analito separado

Tipos de cromatogramas

Cromatograma en papel o capa fina

Cromatograma generado por detectores

Cromatograma diferencial

Cromatograma integral

Parametros analiticos

Volumen muerto

Tiempo muerto

Volumen de retención

Tiempo de retención

Tiempo de retención ajustado

Retención relativa

Factor de capacidad

Asimetría

Resolución

Altura de plato

Número de platos