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第7章 - Coggle Diagram

- - - - 嗜熱性細菌
    - - 具有3'>>>5'外切核酸酶(exonuclease)能力者，可以修正錯誤
    - - 有校正力的聚合酶，正確度才高，可忠實反應模板的序列
    - - 一般是1分鐘可以產生1kb，高效力之聚合酶可以更快，可以製出較長的產物
    - - 需要加熱才能活化聚合酶，可避免引子自行配對所形成之產物
    - - 耐熱性強的聚合酶可以在多個循環之後仍維持一定的效力，因此產量高
  - - - 寡聚核甘酸(oligonucleotide)
    - - 兩條引子的長度不可相差大於3個鹼基數
    - - Tm=2(A+T)+4(G+C)
- - - - PCR的產物越多時，被釋放出的報告者就越多，短波長螢光也就越強
- - - - 一般情況
    - - 選殖的材料來源是mRNA時
        想看在不同的組織，基因的表現是否會不同
  - - - 製造cDNA時，依照不同之需求，可使用
        
        特定基因之引子(gene-specific primer)
        
        因為mRNA的3'端帶有一段聚合腺苷酸尾巴(poly A tail)
        
        可合成所有mRNA的cDNA
        
        只會合成此基因之cDNA
        
        隨機引子(random primers)
        
        是長度為6個鹼基之寡聚核苷酸，但鹼基之種類及順序是隨機組成的
        
        可黏合至RNA的任一個位置，合成出長度不一之cDNA
        
        mRNA很長，或是mRNA內部有二級結構，使得cDNA合成效率很差時，可使用隨機引子來替代其他引子
        
        寡聚胸苷酸(oligo(dT))引子
- - - - 當溫度到達解鏈溫度時，雙股DNA分開，螢光值會驟降，但在10套和10*4套的曲線可看出有兩次的溫度驟降，這代表有兩種PCR產物
    - - 三個不同濃度模板的差異比較容易分辨，位於左邊的波峰代表引子二聚物，因長度較短，因而解鏈溫度較低;右邊的波峰溫度較高，代表是標的產物
  - - - 右邊波峰代表野生型，左邊波峰代表突變型，在基因型鑑定上可分辨成如果只有右邊波峰代表同型野生型，如果只有左邊波峰代表同型突變型，如果兩個波峰都有，代表異型突變型
    - - 即使是不加模板，若是引子自己即可配對，以SYBR Green l 為染色方式還是可以偵測到螢光的增加，這表示SYBR Green l 染色無法分辨非特異性產物
- - - - 限制酶片段多型性
        
        以限制酶切割位置來區分
      - 增幅長度多樣性
        
        利用PCR技術來分析VNTR
      - 變異性重複序列
        
        重複DNA序列造成，因DNA重複之次數不同，造成長度不同
    - - 少數鹼基差異，產生多型性
    - - 體內長度100-400鹼基對之間
      - 可用來鑑定一個人身分
      - 由2-7個鹼基對重複排列所組成
    - - 母系遺傳
      - 高變異區域
        
        此法可鑑定兩個體是否為同一母系
      - 常作為一種鑑識方法
- - - - 95度將DNA分開
    - - 72度，DNA聚合酶製造DNA
    - - 55度，引子與DNA模板結合