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Extracción y purificación de ácidos nucleicos - Coggle Diagram
Extracción y purificación de ácidos nucleicos
Pretratamiento de las muestras biológicas
Consiste en un pretratamiento específico de la muestra biológica concreta que permite obtener las suspensiones celulares sobre las que se realizará la extracción y purificación de ácidos nucleicos
Tipos de pretratamientos
Tejidos animales o vegetales frescos
Homogeneización mecánica automatizada
Homogenización mecánica
Homogenización mecánica manual con mortero
Homogeniación química
Tejidos fijados en formol e incluidos en parafina
Desparafinización
Cultivos celulares
Recolección de las células
Otras muestras
Bacterias
Mucosa oral
Esputo
Levadura
Sangre
Eliminación del sobrenadante
Conservación del sedimento
Centrifugado de la muestra
La lisis de los hematíes
Extracción de ácidos nucleicos
Procesos
La lisis celular para liberar ácidos nucleicos
Composición
Proteasas
Agentes caotrópicos
EDTA
Detergentes
Tratamientos en células con pared celular
Tratamiento mecánico
Tratamiento con CTAB
Tratamiento enzimático
Enzimas
Lisozima
Liticasa o zimolasa
La inactivacón de nucleasas celulares(ADNasas y ARNasas) para evitar la degradación de los acidos nucleicos
Verificación de los resiltados
Si no son buenos
Más solución de lisis
Aumentar la Temperatura
Purificación de los ácidos nucleicos
Cromatografia de adsorción
Purificación mediante esferas magnéticas
Cromatografia de intercambio iónico
Ultrafiltración
Precipitación con sales(salting-out)
Precipitación de proteínas
Precipitación del ADN
Lavado y resuspensión del ADN
Purificación de plásmidos
Purificación con solventes orgánicos
Resuspensión del ADN
Lavado de ADN
Precipitación del ADN
Eliminación de compuestos solubles en solventes orgánicos
Calidad de los ácidos nucleicos
Pureza
Concentración
Integridad
Almacenamiento de los ácidos nucleicos
Condiciones para la integridad de las muestras
Se deben usar tubos tipo eppendorf o criotubos con cierre hermético y libre de nucleasas(ADNasasyARNasas)
Se almacenan en frío
Trazabilidad de las muestras
Uso de etiquetas con codificación alfanumérica (resistentes a temperaturas de -80 grados)
Uso de etiquetas con código de barras o de puntos(resistentes a bajas temperaturas)
Rotulación directa de los tubos(indelebles,resistentes a solventes orgánicos y a bajas temperaturas)