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Reação da Cadeia da Polimerase - Coggle Diagram
Reação da Cadeia da Polimerase
O que é necessário para PCR
Primers
Pedaços curtos de DNA de fita simples, geralmente por volta de 20 aminoácidos de comprimento
Fornece o ponto de partida para a síntese do DNA, escolhido pelo pesquisador
Taq polimerase
Enzima que faz novas fitas de DNA usando as existentes como molde.
Bastante estável ao calor
Nucleotídeos
Responsável pela síntese de novas cópias do material a ser amplificado
Tampão e MgCl2
Amostra
Material que deseja amplificar
Sangue, tecido retirado por biópsia, cabelo, unha, líquidos corpóreos...
Termociclador
Equipamento capaz de aquecer e esfriar de acordo com o sentido da corrente elétrica aplicada.
Etapas da PCR
Anelamento
Anelamento dos primers para cada um dos
modelos de DNA na região específica que se deseja amplificar (50º-65ºdurante 20-40 seg)
Extensão
DNA polimerase sintetiza uma nova cadeia de DNA complementar à matriz de DNA por adição de DNTPs livres complementares ao modelo.
Desnaturação
DNA de cadeia dupla produz duas moléculas de
cadeia simples (91º a 95º durante 30 seg)
Rompe as pontes de hidrogênio e permite a abertura da dupla fita de DNA
Conceito
Grande importância revolucionaria;
Aplicada em diversas áreas: identificação de polimorfismo, genotipagem, detecção de microrganismos, doenças geneticas...
Técnica utilizada para ampliar uma cópia de segmento de DNA em várias ordem de grandeza, gerando milhões de outras cópias de uma região especifícia.
PCR quantitativa:
Auxilio de material fluorescente;
Comparação de quanto aumenta em relação ao outro;
Quanto mais DNA amplificado na região de interesse, maior o sinal de fluorescência identificado;
Transcrição reversa.
Genes virais do teste
PCR e a Covid-19
E - Codifica a proteína do envelope
S - Codifica a proteína espícula
N - Codifica a proteína do nucleocapsídeo
RdRp - Codifica a enzima RNA polimerase e depende da RNA
Revelação do resultado da Amplificação
Possibilita monitorar, em tempo real, o processo de amplificação
Permite a quantificação dos ácidos nucléicos por meio da emissão e capacitação de fluorescência que ocorrre durante todo o processo
Eletroforese em gel de agarose