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QUÍMICA Y BIOLOGIA LEGAL, UNIVERSIDAD PRIVADA FRNAZ TAMAYO FACULTAD DE…

- - - - Víctima
      - Intersticios
      - Paredes
      - Piso
      - muebles
      - Iluminado con luz ultravioleta
      - Fotos, videos y vocetos
    - - Color
      - Tipo
        
        Salpicaduras
        
        Charcos
        
        Regueros
      - Forma
      - Posición
      - Angulo de impacto y distancia
      - Cantidad
      - Procedencia
    - - Evita contaminación de la muestra y el investigador
      - Evita transmisión de enfermedades
      - Manipulación bajo medidas de bioseguridad
        
        Barbijo
        
        Guantes
        
        Lentes
        
        Gorro
    - - Número correlativo
      - Lugar, fecha y hora
      - Breve descripción de la muestra
      - Lugar donde se recuperó la muestra
      - Firma del responsable
  - - - Se retira cuidadosamente el material de su envase
      - Se ubica sobre una superficie adecuada
      - Se retiran objetos extraños de la mancha de sangre
      - Se dibujan contornos de la mancha sobre luz ultravioleta
      - Se enumera
    - - Tienen poca especificidad pero gran sensibilidad
      - Ayuda en la detección de manchas invisibles
      - ESTUDIO CONFIRMATORIO PARA MUESTRA DE UNA MANCHA DE SANGRE
        
        FUNDAMENTO
        
        Actividad de la peroxidasa que posee el grupo HEMO de la hemoglobina
        
        REACTIVO DE Kastel-Meyer
        
        Preparación del reactivo
        
        Disolver 20g de NaOH en 100 ml de agua destilada
        
        Agregar 2g de fenolftaleina
        
        Calentar hasta ebullición con refrigerante de reflujo hasta decolorar la mezcla
        
        Cuando esté fria, decantar e incorporar 20ml de alcohol etílico absoluto
        
        Fenolftaleína reducida con zinc en medio alcalino
        
        Procedimiento
        
        Macerar la mancha con unas gotas de solución fisiológica en un tubo de ensayo
        
        En papel filtro dejar caer unas gotas de la solución
        
        Agregar una gota de agua oxigenada
        
        Realizar lo mismo con el reactivo
        
        Esperar unos segundos
        
        INTERPRETACIÓN DE RESULTADO
        
        Ensayo positivo
        
        Color rosado intenso
        
        Reactivo luminol
        
        3 amino ftalhidrazida disuelto en solucion de carbonato de sodio
        
        Preparación del reactivo
        
        Disolver en 10 ml de agua 0,5 de carbonato de sodio y 0,001 de luminol
        
        Etanol
        
        Agua oxigenada
        
        Pulverizador de vidrio o plástico
        
        Procedimiento
        
        Pulverizar la superficie que se esta investigando con la solucion de luminol
        
        Rociar agua oxigenada
        
        Interpretación de resultados
        
        Prueba positiva
        
        En una habitación oscura se observa luminiscencia azul
    - - Investigación de la especie
      - Tipificación de la sangre humana
      - Determinación del sexo y data de mancha
      - Técnicas microscópicas
        
        Observación de figuras sanguíneas
        
        Hematies
        
        leucocitos
        
        Sangre fresca, muestra ideal
        
        Sangre seca dificulta el analisis
      - Técnicas cromatográficas
        
        Fundamento
        
        Migración diferencial de la muestra con un testigo de sangre y obtención del mismo Rf, en una cromatoplaca
        
        Materiales y reactivos
        
        Cromatoplaca de silicagel
        
        Fase móvil: metanol-ácido acético-agua
        
        Sangre testigo diluida en solución fisiológica
        
        Reactivo revelador: solución verde de malaquita en 10ml de etanol
        
        Solución de agua oxigenada 20 vol
        
        Cámara cromatografica
        
        Pulverizadores
        
        Procedimiento
        
        En la cormatoplaca sembrar 15ul de la muestra y la muestra diluida de sangre testigo 5ul
        
        Colocar en la cámara de desarrollo previamente saturada con la fase movil
        
        Una vez completado el desarrollo, sacar y marcar frente del solvente
        
        Secar en estufa a 100°C durante 5 min. para evitar interferencias
        
        Rociar la placa con el reactivo revelador y luego de 2 min rociar agua oxigenada
        
        Interpretación de resultados
        
        Prueba positiva
        
        Mancha color verde mas o menos intenso con un Rf de 0,7 a 0,8 igual a la muestra testigo
      - Métodos espectroscópicos
        
        Fundamento
        
        Observación del espectro de absorción de la oxihemoglobina (576-542nm)
        
        Materiales y reactivo
        
        Solucion testigo de sangre al 0,5%
        
        Rvo. de Stokes
        
        se disuelve 300mg de FeSO y 200mg de ácido tartárico en 10ml de agua
        
        Espectrofotómetro visible
        
        Cubetas
        
        Blanco: Solución fisiológica
        
        Procedimiento
        
        Se introducen en la cubeta del instrumento 2 o 3 gotas del extracto de la mancha
        
        Se realiza un barrido espectral entre 400 y 600nm con la sangre
        
        Se obtiene los espectros correspondientes
        
        Para mejorar la especificidad se añade una gota de solucion de Stokes
        
        Se agita con una varilla de vidrio y la solución se torna de color violeta
        
        Se observa el espectro nuevamente
        
        La aparicion de una única banda entre las dos anteriores confirma el resultado
        
        Interpretación de resultados
        
        Mancha de sangre reciente
        
        Se aprecia entre las líneas D y E la doble banda de absorcion
        
        Mancha de sangre antigua
        
        La transformacion parcial de la hemoglobina en metahemoglobina, hematina y hemo cromógeno se leera en diferentes espectos
        
        Carboxihemoglobina
        
        Similar a la oxihemoglobina con ligero desplazamiento hacia el violeta
      - Técnicas inmunoquímicas
        
        Suero y las proteínas que lo constituyen son los mejores elementos de identificación específico
        
        Sistema ABO
        
        De los primeros usados en diagnóstico diferencial entre especies e individuos
        
        Puede presentar reacciones cruzadas
        
        Inmunoelectroforesis
        
        No presenta reacciones cruzadas
        
        Permite identificar con precisión al antígeno en una mancha
        
        Enzimainmunoanálisis (EIA)
        
        Se basa en
        
        Alta especificidad del anticuerpo por un antígeno
        
        Amplificación a partir de reacciones químicas llevadas a cabo por enzimas que actúan sobre sustratos que dan lugar a productos coloreados
        
        ELISA
        
        Ensayo de inmunoabsorcion ligado a enzimas
        
        Deteccion de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que producen una reaccion, cuyo producto puede leerse espectrofotométricamente
        
        Dispositivos usados
        
        Microplacas de 96 pocillos de plástico tratado
        
        Espectrofotómetros de lectura de placa
        
        lectores ELISA
        
        FASES
        
        Unión del antígeno o anticuerpo a los pocillos
        
        Formación de una o mas capas de inmunocomplejos
        
        Revelado de la reacción enzimática
        
        ELISA sanswich
        
        Ensayo de captura de antígeno y detección mediante inmunocomplejos
        
        Se recubre el pocillo con un premier anticuerpo anti.antígeno
        
        Se lava el exceso de anticuerpo y se aplica la muestra problema
        
        Se aplica una solucion con un segundo anticuerpo anti-antígeno marcado
        
        Tipificación de machas de sangre humana: Marcadores de DNA
        
        Muestras
        
        Artículos personales
        
        cepillo de dientes
        
        máquina de afeitar
        
        Banco de muestras
        
        Esperma
        
        biopsias
        
        Parientes de sangre
        
        Restos humanos previamente identificados
        
        Análisis comparativo de DNA mitocondrial
        
        Huella genética
        
        Identificacion a partir de
        
        Sangre
        
        Cabello
        
        Saliva
        
        Semen
        
        Usa
        
        Pruebas de paternidad
        
        Compatibilidad de donacion de órganos
        
        estudio de poblaciones de animales silvestres
        
        DNA microsatélite
        
        DNA es susceptible a la amplificacion por PCR
        
        DNA minisatélite