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Produire une protéine recombinante - Coggle Diagram

- - - - pET
        Système d'induction
        Opéron lactose (par IPTG)
        Gène d'intérêt à la place de LacZ, Y, A
        Hôte : bactérie
      - Propriétés :
        1 ORI
        1 marqueur de sélection AmpR
        Site multiple de clonage
        Supporter l'insertion d'un fragment d'ADN
        1 promoteur fort et souvent inductible
        1 terminateur
        Sites de fixation au ribosomes
        Codon start ATG
        Codon stop TAA
    - - Vecteurs épisomiques (extrachromosomal)
        S. cerevisae
        Gène d'intérêt : prot de surface de l'hépatite B
        Hôte : levure
      - Vecteurs intégratifs
        P. pastoris
        Promoteur AOX1 inductible par méthanol
        Hôte : levure
      - Propriétés :
        2 ORI (1 bactérien et 1 de levure)
        2 marqueurs de sélection (AmpR et neoR)
        Sites multiples de clonage
        1 promoteur fort et inductible
        1 signal de terminaison (CYC1)
        Site de fixation des ribosome
        Codon start ATG
        Codon stop TAA
      - Vecteur épisomique et intégratif
        Transfection transitoire ou transfection stable (sélection)
        Gène d'intérêt : ADNc
        Hôte : Cellules CHO (Chinese Hamster Ovary)
    - - Baculovirus
        Gène d'intérêt
        Hôte : cellule eucaryote d'insecte
      - Propriétés :
        Virus lytique
        Bicaténaire capable d'intégrer un transgène de 10kb
- - - - E. Coli
        
        Avantages :check:
        Rendement d'expression élevé (plusieurs g/L)
        Génétique très bien connue
        Facile à cultiver (bioréacteur)
        
        Inconvénients :red_cross:
        Contamination des protéines par des endotoxines
        Formation de corps d'inclusion
        Faible potentiel de sécrétion
        Pas de modif post-trad des protéines
      - GRAS (Generally Recognized As Safe)
        Bacillus subtilis
        Streptomyces
        
        Avantage :check:
        Fort potentiel de sécrétion
        
        Inconvénients :red_cross:
        Génétique moins connue
        Taux d'expression plus faible
    - - Avantages :check:
        Rendement d'expression élevé (100mg/L)
        Aucune toxicité
        Facile à cultiver
        Vecteurs de clonage commerciaux
        Modif post-trad complètes
      - Inconvénient :red_cross:
        Faible potentiel de sécrétion pour les grandes protéines
    - - Cellules de mammifères CHO
        
        Avantages :check:
        Synthèse de protéines complexes de haut PM
        Modif post-trad complètes
        Culture de masse en bioréacteur
        
        Inconvénients :red_cross:
        Rendements faibles (10mg/L)
        Cellules fragiles
        Culture onéreuse
      - Cellules d'insecte
        Ex : Spodoptera grugiperda
        
        Avantages :check:
        Rendement d'expression élevé (1g/L)
        Modif post-trad presque complètes
        Possibilité de sécrétion de la protéine recombinante
        Vecteur (Baculovirus) non pathogène pour l'Homme
        
        Inconvénients :red_cross:
        Pas d'acide sialique dans les glycosylations
        Système de fermentation spéciaux
        Coût élevé de la production