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Calidad de los ácidos nucleicos purificados - Coggle Diagram
Calidad de los ácidos nucleicos purificados
Parámetros
Integridad
Pureza
Concentración
Integridad
Es el parámetro que determina si un ácido nucleico conserva su tamaño original
La mejor manera de valorar la integridad es la electroforesis en gel de agarosa al 0,7%-1,2%
El resultado esperado en la electroforesis varía
ADN genómico
ADN plasmídico
ARN
Pureza
Es el parámetro que determina la ausencia de posibles contaminantes
La medida del grado de pureza se basa en una de las propiedades de los ácidos nucleicos: su máxima absorbacia a una longitud de onda de 260 nm
Valores del cociente A260/A280 en el ADN y posibles correcciones
Grado de pureza adecuado cuando el cociente A260/A280 tiene un valor entre 1,7 y 2
<1,6 contaminación excesiva de la muestra por proteínas o fenoles
2,0 concentración elevada de ARN
Valores del cociente A260/A280 en el ARN
Grado de pureza adecuado cuando el cociente A260/A280 tiene un valor entre 1,8 y 2,1
Cociente A260/A280
El ácido nucleico es puro cuando el cociente A260/A280 se encuentra entre 1,5 y 2,2
<1,5 indica presencia de contaminantes
Concentración
Es la cantidad de ácido nucleico por unidad de volumen de solución final
Absorbancia a 260 nm
Factores de conversión
Una unidad de absorbancia equivale a 50 ng/ul o 50 ug/ml de ADNds
Una unidad de absorbancia equivale a 33 ng/ul o 33 ug/ml de ADNss
Una unidad de absorbancia equivale a 40 ng/ul o 40 ug/ml de ARN
Concentración de ácido nucleico en ng/ul o ug/ml = (A260-A280) x factor de dilución x factor de conversión
La cantidad total de ácido nucleico purificado en ng es igual concentración de la solución en ng/ul por el volumen de resuspensión en ul