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Enzimas empleadas en biología molecular - Coggle Diagram
Enzimas empleadas en
biología molecular
Nucleasas
Enzimas que cortan y degradan los ácidos nucleicos mediante hidrólisis del enlace fosfodiéster entre dos nucleótidos
Clasificación
Tipo de ácido nucleico que atacan
Nucleasas de ARN
Enzimas capaces de romper enlaces fosfodiester entre ribonucleótidos
Nucleasas de ADN
Enzimas capaces de romper enlaces fosfodiester entre desoxirribonucleótidos
Tipo de cadena que atacan
Nucleasas que atacan moléculas bicatenarias, rompiente enlaces en ambas cadenas
Nucleasas que solo atacan moléculas monocatenarias
Especificidad del corte
Nucleasas que cortan aleatoriamente
Nucleasas que cortan en sitios concretos de la molécula
Endonucleasas de restricción
Endonucleasas bacterianas que reconocen secuencias cortas de ADN bicatenario y producen un corte en la doble cadena en esa secuencia o cerca de ella, fragmentando la molécula
A las secuencias de ADN específicas que reconoce se las llama dianas de restricción
En las bacterias constituyen un sistema de defensa inmune dado que su función es degradar el ADN exógeno
Para evitar fragmentar su propio ADN, las bacterias se protegen modificando sus dianas de restricción mediante metilación de bases nitrogenadas
Tipos de corte
Extremos romos
El corte se produce en el mismo punto en las dos cadenas, generalmente en el centro de la diana de restricción
Extremos cohesivos
El corte se produce en puntos distintos de ambas cadenas, normalmente en los extremos de la diana de restricción
Esto genera en cada extremo sendas regiones monocatenarias cortas y complementarias entre sí, lo que hace que sean muy reactivos al poderse adherir a fragmentos de ADN que tengan secuencias de bases complementarias
Aplicaciones
Permite crear moléculas de ADN recombinante
Identificar patrones de restricción
ADN polimerasas
Permiten realizar copias de moléculas de ADN mediante replicación
Más usadas son de los tipos I y III
Para realizar su función requieren que en el medio de reacción estén presentes
Los cuatro desoxinucleotidos trifosfato
Un ADN molde
Cebadores
Mg2+ como cofactor
Diferenciación polimerasas
La velocidad de polimerización
La fidelidad en la replicación
La termoestabilidad
La presencia o ausencia de actividad exonucleasa además de la actividad polimerasa
Retrotranscriptasas
Son ADN polimerasas-ARN dependientes, sintetizan molécula de ADN utilizando ARN como molde
El ADN sintetizado se llama ADN copia (ADNc)
Ha permitido
Realizar estudios masivos de ARN
La amplificación de ARN
Ligasas
Unen dos moléculas de ADN mediante formación de enlaces fosfodiester entre los extremos 3’ de una de las moléculas y 5’ de la otra
Puede reparar mellas en una de las cadenas de ADNds mediante la formación del enlace fosfodiéster
Topoisomerasas
Relajan la tensión de la doble hélice de ADN próximas a las burbujas de replicación o transcripción
Se utiliza para relajar estructuras superenrolladas de ADN