Please enable JavaScript.

Coggle requires JavaScript to display documents.

Metode proučavanja stanica - Coggle Diagram

- - - - inicijalno uspostavljena stanična kultura
      - rastu dok ne prekriju cijelu površinu dna posudice
      - mogu se izvaditi i u razrijeđenoj koncentraciji presaditi u nove posudice - SEKUNDARDNA KULTURA
    - - sposobnost neograničene proliferacije (zameci, tumor)
      - npr. embrionalne matične stanice - sposobnost diferencijacije u sve stanične podtipove odraslog organizma
      - medij: sol, glukoza, aminokiseline, vitamin uz serum (izvor faktora rasta)
      - Harry Eagle-definirao medij za rast animalnih stanica
    - - prve stanične kulture - stanice narasle iz fragmenata tkiva nasađenih u ugrušak krvi
      - stanične linije koje se prihvaćaju za dno posude i dalje rastu u nedefiniranom mediju (serum i ekstrakti embrija)
      - najstarija i najčešće korištena besmrtna stanična linija; uspostavljena iz biopsije cervikalnog raka 1951. g. uzete iz bolesnice Henriette Lacks (Baltimore)
      - prve ljudske stanice koje su dobro rasle u laboratoriju
- - - - diferencijalno centrifugiranje
        
        liziranje stanica, odvajanje serijama pri sve većim brzinama
        
        organeli se sedimentiraju na dnu epruvete te se mogu izdvojiti iz taloga
        
        supernatant se ponovo centrifugira pri većoj brzini da se sedimentiraju ostali organeli
        
        ultracentrifuga; uzorci nisu u potpunosti čisti već su obogaćeni
      - centrifugiranje u gradijentu gustoće
        
        organeli se razdvajaju sedimantiranjem kroz gradijent guste tvari (saharoza)
        
        čestice sedimentiraju duž gradijenta kao odvojene pruge (uzorak se nadsloji na vrh gradijenta)
        
        probadanjem dna epruvete: sakupljanje frakcije - pojedine frakcije gradijenta
      - ravnotežno centrifugiranje
        
        razdvajanje staničnih komponenti na bazi njihova plutanja uzrokovanog uzgonom, a neovisno o veličini i obliku
        
        npr. hrapavi ER se odvaja od glatkog jer ima ribosome i time veću gustoću
  - - - naziv stanica
      - mikroskop s povećanjem 300 (promatrao komadić pluta)
    - - razlikovao tipove stanica: spermiji, eritrociti, bakterije
    - - stanična teorija - svi organizmi sastoje se od stanica
      - stanica je najmanja jedinica života
      - nove stanice stvaraju se samo iz postojećih
    - - Head/body - optical parts in the upper part of the microscope
      - The base - supports the microscope and houses the illuminator
      - The arm - connects to the base and supports the microscope head
    - - okvir (frame work)
      - sustav za podešavanje (adjustment system)
      - sustav za povećavanje (magnification)
      - sustav za svjetlost (light system)
    - - mogu se promatrati žive stanice
      - ako je uzorak obojen, slike prikazuju različite dijelove stanica u boji
    - - limitirajuća rezolucija (moć razlučivanja), 0,2mikrom
    - - najmanja udaljenost na kojoj su dvije bliske točke prikazane odvojeno
      - manja udaljenost između dvije točke = veća snaga rezolucije mikroskopa
    - - stožasti snop svjetla koji ulazi u leću objektivna nakon prolaska kroz uzorak
      - određena je kutom stožastog snopa svjetla koje ulazi u leću objektiva i indeksom refrakcije medija (ulje/zrak) između leće i biološkog uzorka
- - - - žive stanice
      - fiksiranje (reaktivni aldehidi)
      - stanice iz stanične kulture
      - tkiva (uklapanje i rezanje na tanke prereze mikrotom/kriostatom)
      - bojanje organskim bojama specifičnim za pojedine dijelove stanice (povećanje kontrasta bojama koje vežu proteine ili nukleinske kiseline)
- - - - bojanje uzoraka solima teških metala
      - fokusiranje na fluorescentnom zaslonu gdje se stvara slika
      - obojana područja su tamne boje
      - pozitivno (ultratanki rezovi, bojanje solima teških metala: OSMIJ TETRAOKSID, URANOV ACETAT, OLOVNI CITRAT, tamno obojenje) i negativno bojanje (intaktne biološke strukture, biološki uzorak prekriven tankim filmom, nanosi se metalna boja, neobojani uzorak okružit će se filmom boje, svijetao uzorak nasuprot tamno obojenoj pozadini)
    - - 3D slika stanice
      - ne prolazi snop kroz uzorak
      - površina stanice prevučena teškim metalom, skeniranje površine
      - elektroni se raspršuju i prikupljaju uzorke i tvori se 3D