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QUÍMICA Y BIOLOGÍA LEGAL, image, ESTUDIANTE:GRETHA M. ALURRALDE…

- - - - Se debe examinar el color de las manchas de sangre, el tipo de manchas de sangre (salpicaduras, charcos, regueros por escurrimiento, etc.), la forma y la posición de las manchas de sangre.
      - Todo elemento de origen biológico, sea en forma de mancha o fluido, debe ser manipulado en condiciones de asepsia para evitar la contaminación, por esta razón deben manipularse estas muestras adoptando medidas de bioseguridad.
      - En muchas ocasiones es necesario comenzar iluminando el sitio con luz ultravioleta, tomando fotografías, videos y ejecutando bocetos.
      - Posteriormente se realiza el traslado de las muestras al laboratorio, es importante que no se agregue ningún preservante a las muestras y que los recipientes de las muestras estén debidamente etiquetados con: número correlativo, lugar, fecha, hora, breve descripción de la muestra, lugar donde se recupero la muestra en la escena y firma del responsable de la diligencia.
      - La recolección de las evidencias se inicia con la búsqueda de las mismas, la cual debe realizarse en el escenario del delito, con la revisión minuciosa de todas las superficies y los objetos que en el se encuentren.
- - - - Se retiran todos los objetos de las manchas de sangre, como insectos, pelos, basuras, etc., conservándolos apropiadamente en envases o cajas petri.
      - Si es necesario se dibujan los contornos de las manchas de sangre bajo la luz ultravioleta y por último se enumera las muestras.
      - Primero se retira cuidadosamente el material recibido de su envase y se lo coloca en una superficie adecuada.
    - - Estas pruebas no son determinantes, solo sirven únicamente a modo de orientación. Se realiza especialmente cuando existe suficiente cantidad de muestra, estos ensayos son útiles para detectar pequeñas manchas, invisibles a simple vista o para excluir una mancha que por su aspecto y forma aparenta ser sangre.
      - Fundamento: Se basan en la actividad de la peroxidasa que posee el grupo HEMO de la hemoglobina de la sangre y que, en presencia de agua oxigenada y ciertos reactivos orgánicos, proporcionan la aparición de coloración o luminiscencia muy orientativas sobre un posible hallazgo de sangre.
        
        Entre los reactivos de los ensayos preliminares están:
        
        Reactivo de Kastel – Meyer (Fenolftaleína reducida con zinc en medio alcalino): En un ensayo positivo se observa un color rosado intenso en presencia de agua oxigenada y vestigios de sangre, después se lleva a reacciones específicas.
        
        Reactivo de luminol (Luminol disuelto en solución de Carbonato de sodio): En un ensayo positivo se observa una luminiscencia azul, después se lleva a reacciones específicas.
    - - Están basados en poner de manifiesto algún elemento característico de la sangre (elementos formes o hemoglobina). Entre las sustancias que pueden dar falsos positivos están las peroxidasas vegetales y orgánicas, sales de cobre y oxidantes químicos.
        
        Técnicas cromatográficas
        
        Estas técnicas se basan en la migración diferencial de la muestra con un testigo de sangre y la obtención del mismo Rf, ambos sembrados en una cromatoplaca.
        
        En caso de existencia de sangre aparece una mancha de color verde mas o menos intensa con un Rf de 0.7 a 0.8 igual al de la muestra testigo.
        
        Métodos espectroscópicos
        
        Consiste en observar el espectro de absorción de la oxihemoglobina, caracterizado por dos bandas de absorción correspondientes a las longitudes de onda de 576 – 578 nm y 540 – 542 nm, respectivamente, situadas entre las líneas D y E del espectro visible.
        
        Si la mancha es de sangre reciente, se apreciará entre las líneas D y E la doble banda de absorción característica de la oxihemoglobina a las longitudes de onda correspondientes.
        
        Técnicas microscópicas
        
        Estas técnicas hallan su fundamento en la observación de los elementos de la sangre como los hematíes y los leucocitos, cuya presencia demuestra la naturaleza sanguínea de las manchas.
        
        La observación de sangre fresca no ofrece problemas, sin embargo, esto se dificulta cuando se tiene sangre seca o en estado de putrefacción.
- - - - Mediante este método se puede identificar genéticamente cantidades infinitesimales de restos biológicos, aun en mal estado de conservación. Para la identificación del ADN se ha de realizar su extracción en muestras de sangre, cabello, saliva, semen y restos humanos identificados.
  - - - 2.Enzimainmunoanálisis (EIA): Se basa en dos fenómenos biológicos el primero es la alta especificidad del anticuerpo por un antígeno y el segundo es la amplificación a partir de reacciones químicas llevadas a cabo por enzimas las cuales actúan sobre sustratos que originan productos coloreados (reacción indicadora).
      - 3.ELISA: Se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectroscópicamente.
        
        Dispositivos empleados en ELISA: Los lectores ELISA constituyen espectrofotómetros capaces de ejecutar lecturas seriadas de cada uno de los pocillos de la placa ELISA.
        
        Fases de un ensayo ELISA: Las fases de un ensayo ELISA comienzan con la unión del antígeno o del anticuerpo a los pocillos, luego ocurre la formación de una o más capas de inmunocomplejos y después se produce el revelado de la reacción enzimática.
      - 1.Inmunoelectroforesis: La técnica de inmunoelectroforesis no presenta reacciones cruzadas, dado que se puede identificar con mayor precisión el antígeno presente en la muestra.