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限制酶及其他核酸酵素 - Coggle Diagram

- - - - 而外切核酸酶則是從DNA的3'端開始將核苷酸一個一個切除，這種動作又稱為水解，大部分的核酸水解酶都是如此作用的
    - - 限制酶是一種典型的內切核酸酶代表，也就是直接切在DNA的中間
- - - - 利用T4 噬菌體的DNA聚合酶將突出的3`端核甘酸修剪成平端
    - - RNase H
    - - 利用Klenow片段將他補齊
    - - T7 RNA Polymerase 及 T3RNA Polymerase
  - - - DNase I－DNA水解酵素I
    - - Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
    - - Exonuclease III－DNA外切水解酵素III
    - - 依照作用的位置區別
  - - - 從不同的菌種可純化出認是相同序列的限制酶，但名稱不同。
    - - (2) RNase H
      - (3) 利用Klenow片段
      - (1) 以mRNA當模板，利用反轉錄酶可以作出cDNA
    - - 細菌可修飾自己的DNA，把A或G的位置甲基化(methylation)，每種細菌的甲基化模式不同，細菌可辨識，故其不會切自己的DNA
    - - (1) Klenow fragment
  - - - DNA聚合酶中具有5'至3'方向聚合活性的部分
      - 在合成新的DNA時，能真正合成DNA長鏈，相較之
        下，對於只需補齊幾個核苷酸的工作，Klenow片段輕易能完成。
    - - Reverse Transcriptase
    - - 1.切除
      - 2.一定要補充足量的dNTP
    - - 補齊
        
        解讀DNA序列
        
        體外突變
        
        合成cDNA（互補DNA）的第二股
        
        單股探針
        
        Random priming
  - - - 迴文的另一股DNA序列:GCATGC，ACATGT，ATGCAT
      - 迴文序列:CGTACG，TGTACA，TACGTA
    - - 88888*8=262144
    - - BamHI
- - - - 將比RNA 5’端長的DNA部分水解，定出5‘ RNA相對應的DNA序列位置
      - 常被用來定出mRNA轉錄起點的酵素
- - - - DNA聚合酶中具有5至3方向聚合活性的部分，合成新的DNA時，是真正能和成DNA長鏈的酵素的部分
    - - 3.體外突變(in vitro mutagenesis)
        
        利用合成的單股突變寡聚核苷酸作為引子，Klenow片段可以繼續合成質體，而突變的寡核苷酸即成為質體的一部分，便產成帶有突變的質體
      - 4.合成cDNA(互補DNA)的第二股
        
        當以mRNA當模板，利用反轉錄酶可以作出cDNA，這只是單股的DNA，再利用Klenow片段即可以合成第二股DNA，如此，就得到完整的cDNA
      - 2.解讀DNA序列(Sequencing DNA)
        
        以適當的引子，用特別標記的dNTP，Klenow片段就能依據模板合成可解讀的序列。
      - 5.單股探針
        
        許多的實驗中，會需要用到能與特定DNA或RNA雜交(hybridize)的探針(probe)，利用特別標記的dNTP當原料，Klenow片段即可合成這類探針
      - 1.補齊
        
        在基因選殖時，將DNA片段5'突端補成平端，以利接合。
      - 6.Random priming
        
        這是另一種標記探針的方法，以隨機組合的六個核苷酸長度的寡聚核苷酸當成引子，即可從DNA的隨機位置開始合成DNA探針
  - - - T4嗜菌體(bacteriophage)的DNA聚合酶將突出的3`端核甘酸修剪成平端
    - - 酵素作用機制是先從3往5切除很多核甘酸
  - - - dNTP
        
        dTTP
        
        dCTP
        
        dATP
        
        dGTP
    - - 先以Klenow片段處理
        
        再以T4DNA聚合酶處理
- - - - 雙鏈DNA中的一段倒置重複序列，當該序列的雙鏈被打開後，可形成髮夾結構
    - - 其特點是在該段的鹼基序列的互補鏈之間正讀反讀都相同（並非在同一條鏈上正讀反讀）
- - - - 最常用，來源較多，較易利用
    - - 核甘酸的序列很難出現，來源極少
    - - 核甘酸的序列出現太頻繁，不易利用
    - - 從不同的菌種可純化出認是相同序列的限制酶，但名稱不同。
  - - - 線形化(linearize)
    - - 平端(blunt end)
      - 突端(sticky end)
        
        5'突端
        
        3'突端