Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
Métodos de detecção de proteína, image, image, image, image - Coggle…
Métodos de detecção de proteína
Western Blot
Primeiro há a extração da proteína e depois usa a eletroforese em gel para separar as proteínas (por meio de poros) pelos seus pesos moleculares;
Em seguida, há a transferência do gel para a membrana de microcelulose por meio da capilaridade ou transferência eletroforética, que é montada em uma placa de vidro e segue para outra eletroforese;
A membrana é lavada e corada por ponceau S, que evidencia as proteínas e os pesos moleculares, logo depois ela é encubada em anticorpo primário e depois com secundário especificos para o que será estudado;
Vantagens: pode ser lavada e utilizada diversas vezes com anticorpos diferentes, usa pequena quantidade de reagente, altamente sensível e específica;
Aplicação clínica: teste de confirmação do HIV, detecção da doença de Lyme e da toxoplasmose congênita.
Zimografia
É uma técnica semiquantitativa, que é utilizada para determinar os níveis de MMP (metaloproteinases da matriz) em amostras;
Capaz de detectar formas ativas e latentes das MMPs e quantificar a atividade enzimática;
Inicia-se com a eletroforese e, posteriormente, ocorre a incubação com gel e reagentes, este serve para reativar as proteínas e degradar a gelatina;
Aplicações: cultura de célula, urina, soro e estudos relacionados a MMPs;
Foi desenvolvida usando gelatina como substrato para mensurar a atividade enzimática das gelatinases;
Desvantagens: requer investigações preliminares.
Vantagens: técnica simples, barata e rápida, além de servir para avaliar várias enzimas;
Método simples, sensível e quantitativo funcional para análise de atividade proteolítica;
ELISA
De captura
É um método indireto
Adição de outros dois anticorpos
Anticorpos no fundo
Adição de antígeno biotinilado (marcado com a proteína biotina) que se liga ao anticorpo específico
Após a lavagem, é adicionado a enzima que se liga a biotina e, posteriormente, é adicionado o substrato para enzima.
De competição
Anticorpo no fundo
Acrescenta o antígeno do paciente
É um método direto
Acrescenta o antígeno biotinilado
Haverá uma competição entre os antígenos, o que tiver a ligação mais forte ficará ligado ao anticorpo
Se o antígeno biotinilado tomar o lugar, a ligação do anticorpo com o antígeno do paciente não era especifica e ocorrerá a reação, caracterizando como negativa.
Indireto
Antígeno no fundo
Adição de anticorpo primário
Adição de anticorpo secundária conjugado com enzima, específico para o anticorpo primário
Adição de substrato para enzima.
Direto
Anticorpos específicos no fundo
Adiciona antígeno da urina ou do soro
Lavagem para retirar o excesso que não se ligou
Adição de anticorpo conjugado com enzima
Adição de substrato para a enzima, no qual esta enzima é um agente fluorescente, e quando há mudança de cor, quer dizer que o resultado é positivo.
Baseia-se em reações antígeno-anticorpo detectáveis por meio de reações enzimáticas (teste imunoenzimáticos).
Indicações
Detectar hormônios, HIV, hepatite B, ferritina
Detectar concentração de drogas ilícitas na urina
Detectar HCG
Detectar alérginos nos alimentos
