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限制酶及其他核酸酵素, 限制酶的選用, 10941019A, 10941001A - Coggle Diagram

- - - - 合成適當的轉錄產物
- - - - 對於5'突端，一般是利用DNA複製時的主要酵素DNA聚合酶I中的部分酵素－Klenow片段將它補齊
        
        Klenow片段利用5'突端作為模板，在短缺的3'端加上互補的核苷酸，而將5'突端補成平端，保留住原本的5'突端序列
        
        在反應進行時，一定要提供製作DNA的原料dNTP
        
        dATP
        
        dCTP
        
        dTTP
        
        dGTP
        
        因為Klenow片段原本是DNA聚合酶中具有5'至3'方向聚合活性的部分，也就是說在合成新的DNA時，它是真正能合成DNA長鏈的酵素部分
        
        它是相當常用的一種核酸酵素，廣泛應用在許多的技術上
    - - 在基因選殖時，將DNA片段5'突端補成平端，以利接合。
    - - 以適當的引子，用特別標記的dNTP，Klenow片段就能依據模板合成可解讀的序列。
    - - 利用合成的單股突變寡聚核苷酸作為引子，Klenow片段可以繼續合成質體，而突變的寡核苷酸即成為質體的一部分，便產成帶有突變的質體。
    - - 當以mRNA當模板，利用反轉錄酶可以作出cDNA，這只是單股的DNA，再利用Klenow片段即可以合成第二股DNA，如此，就得到完整的cDNA。
    - - 許多的實驗中，會需要用到能與特定DNA或RNA雜交(hybridize)的探針(probe)，利用特別標記的dNTP當原料，Klenow片段即可合成這類探針
    - - 這是另一種標記探針的方法，以隨機組合的六個核苷酸長度的寡聚核苷酸當成引子，即可從DNA的隨機位置開始合成DNA探針
  - - - 但此酵素的作用機制實際上是先從3'往5'端切除很多核苷酸，再將之補齊至與3'端相當。
        
        一定要補充足量的dNTP。
        
        否則T4 DNA聚合酶無法正確地完成應有的切除工作，這也是以T4 DNA聚合酶處理DNA常產生錯誤的序列，無法得到預期產物的原因。
    - - 否則未經Klenow片段處理的5'端，很容易被T4 DNA聚合酶切成短缺。
- - - - 外切核酸酶
        
        從DNA的3'端開始將核甘酸一個個切除-水解
      - 內切核酸酶
        
        直接切DNA中間
  - - - 是最典型的核酸水解酵素，幾乎能將DNA完全分解
      - DNA上有蛋白質結合在某些位置上，他就會被擋下來不能繼續，留下兔定長度的DNA
    - - 會從雙股DNA上任何一個缺口開始，將和肝酸從3端往5端水解，產物維平端
- - - - 功用
        
        定出5′RNA相對應的DNA序列位置
        
        定出mRNA轉錄起點
      - 作法
        
        將比RNA 5′端長出的DNA部分水解
      - 目的
        
        認識RNA-DNA
    - - 作用
        
        負責水解原來的RNA
      - 使用時機
        
        反轉錄病毒，反轉錄出DNA後
      - 特性
        
        不會切
        
        雙股DNA
        
        雙股RNA
        
        單股核酸
        
        作用
        
        能將第一股cDNA產生出的mRNA去除，以便合成第二股cDNA
      - 目的
        
        認識DNA-RNA雜交物
    - - 作用
        
        類似RNase A
        
        切碎RNA
      - 切解位置
        
        G位置的3′端
    - - 切解位置
        
        單股RNA中嘧啶的3′端
      - 作用位置
        
        RNA-DNA
        
        RNA-RNA
      - 作用
        
        把RNA切碎分解
      - 應用
        
        幫助純化DNA時去除RNA步驟
- - - - 稱為線性化(linearize)