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Tinciones diferenciales tinción Gram Tinción : Ziehl Neelsen
La tinción de Ziehl-Neelsen en una técnica de coloración para identificar microorganismos alcohol-ácido resistentes (AAR).
El nombre de este procedimiento de microbiología hace referencia a sus autores: el bacteriólogo Franz Ziehl y el patólogo Friedrich Neelsen.
Esta técnica es un tipo de coloración diferencial, lo que implica el uso de distintos colorantes con la finalidad de crear contraste entre las estructuras que se desean observar, diferenciar y posteriormente identificar.
La tinción de Ziehl-Neelsen sirve para identifica ciertos tipos de microorganismos estos son micobacterias (por ejemplo, Mycobacterium tuberculosis), nocardias (por ejemplo, Nocardia sp.) y algunos parásitos unicelulares (por ejemplo, Cryptosporidium parvum).
Muchas de las bacterias pueden clasificarse a través de una técnica común llamada tinción de Gram.
No obstante, algunos grupos bacterianos requieren otros métodos para poder identificarlos. Técnicas como la tinción de Ziehl-Neelsen requieren combinaciones de colorantes con calor para fijar el primero a la pared celular.
Luego viene un proceso de decoloración que permite obtener dos resultados: resistencia o sensibilidad a la decoloración por ácidos y alcoholes.
Colorante secundario
Después de la decoloración de la muestra, esta se contrasta con otro colorante llamado colorante secundario. Generalmente se utiliza el azul de metileno o el verde de malaquita.
El colorante secundario tiñe el material de fondo y, en consecuencia, crea contraste a las estructuras que fueron teñidas en el primer paso.
Solo las células decoloradas absorben el segundo colorante (contra-tinción) y toman su color, mientras que las células ácido-resistentes conservan el color rojo.
Este procedimiento se usa frecuentemente para la identificación de Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae, las cuales son llamadas bacilos ácido-alcohol resistentes.
Colorante primario
Se usa carbol fucsina al 0,3 % (filtrado).
Este colorante se prepara a partir de una mezcla de alcoholes: fenol en etanol (90 %) o metanol (95 %), y en esta mezcla se disuelven 3 gramos de fucsina básica.
Solución decolorante
En este paso se pueden emplear soluciones de ácido alcohol al 3 % o ácido sulfúrico al 25 %.
Técnica
Procedimiento de tinción ácido-rápida
Cubrir la mancha
Calentar la mancha
Calentar la muestra
Lavar la mancha
Secado del frotis
Cubrir el frotis con alcohol ácido
Preparar un frotis bacteriano
Lavar la mancha
Cubrir el frotis con colorante
Lavar la mancha
Drenar
Examinar el frotis en el microscopio
Interpretar los resultados