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Técnicas de hibridación - Coggle Diagram
Técnicas de hibridación
Localizar fragmentes específicos de A. Nucleicos
Southern blot
Descrita
Se utiliza
Para determinar la presencia de
un gen o fragmentos del ADN de Á. nucleicos extraídos
procesos fundamentales:
Desnaturalización de las cadenas complementarias del ADN
Hibridación de dos cadenas
complementarias
Procedimiento técnico
Una vez extraído el ADN se dirige con enzimas de restricción y los fragmentos se
separan por electroforesis en geles de agarosa
Posteriormente, el ADN se desnaturaliza para obtener cadenas sencillas
Los fragmentos se transfieren a una membrana de nitrocelulosa
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1975 por Edwin
Southern
hibridación in situ
Método histoquímico
Se basa en la unión de una sonda con una secuencia complementaria de
ADN o ARN dentro de un tejido
No requiere de la
extracción de ácidos nucleicos
Las sondas pueden ser radiactivas o no radioactivas
Procedimiento técnico
Preparación y fijación del tejido
La fijación con formalina, seguida de una inclusión con parafina
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Northern blot
Se utiliza ARN
No utiliza enzimas de restricción
Prodecimiento en general
Electroforesis, desnaturalización, transferencia y la hibridación con una sonda
Dot blot
No se realiza electroforesis, se aplican directamente a la membrana
La fiiación se hace generalmente con vacío y en un molde cuyo pocillo puede tener forma de punto (dot blot) o ser lineal (slot blot)
Slot blot