Please enable JavaScript.
Coggle requires JavaScript to display documents.
ELECTROFORESIS DE ADN Y ARN, Diagrama de flujo #9 - Luisa María Cuello…
ELECTROFORESIS DE ADN Y ARN
¿Qué es la electroforesis?
La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico. El polímero utilizado para el análisis electroforético de ácidos nucléicos de gran tamaño es la agarosa. Por eso en este experimento este polímero será de gran relevancia.
Etapa 1: preparación de agarosa
1.1
Pesamos 2 g de agarosa en polvo, tomamos 200 ml de tampón TAE 1x, luego agregamos los 2 g de agarosa al tampón TAE 1x y agitamos.
1.2
Calentaremos la mezcla en un horno microondas por 1:30 min, pasado 1 min pausamos el microondas, agitamos y volveremos a introducirlo, luego de esto dejaremos que la mezcla se enfríe a 60°C y le añadiremos 3 μl de bromuro de etidio.
Etapa 2: Fundición del gel
2.1
Tomamos la bandeja de gel y la cerraremos, luego insertaremos el peine, tomaremos el gel de agarosa y lo verteremos en el gel.
Etapa 3: Configuración de la cámara de electroforesis
3.1
Colocamos la bandeja de gel en el tanque de gel y nos aseguraremos de que los pocillos estén en el lateral
del electrodo –ve, posteriormente agregaremos 1x solución tampón TAE a cada extremo del tanque de gel, sacamos el peine.
3.2
Mezclamos 10 μl de la muestra de ADN con 2 μl del tampón de carga de gel 6x y Mezclamos el tampón de carga de gel con la muestra, agitando con la punta de una pipeta .
Etapa 4: Carga del gel
4.1
Cargamos lentamente las muestras en los pocillos de gel tomando 10 μl de cada muestra
con pipeta y añadimos al pocillo, teniendo en cuenta que se debe utilizar una nueva punta para agregar a cada muestra.
4.2
Cargamos 10 μl de la escalera de ADN previamente teñida, después cerramos la tapa del tanque y nos aseguramos de colocar a los electrodos en las posiciones correctas.
Etapa 5: Electroforesis
5.1
Configuramos la fuente de alimentación en 100 voltios, esto creará corriente eléctrica a través del gel y comenzará la separación de los fragmentos de ADN.
5.2
Después de unos minutos observaremos migrar el tinte con fragmento de ADN
de los pocillos al gel, después de que el azul de bromofenol emigra del electrodo negro al electrodo rojo apagamos la fuente de alimentación.
Etapa 6: Visualización del ácido nucleico
6.1
Colocamos la bandeja de gel en el iluminador trans UV para visualizar los
fragmentos de ADN separados, encendemos el iluminador trans UV y visualizaremos nuestros
Fragmentos de ADN
Diagrama de flujo #9 - Luisa María Cuello Montes
