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Métodos de identificación - Coggle Diagram
Métodos de identificación
Métodos fenotípicos
Características observables
Morfología
Propiedades bioquímicas y metabólicas
Desarollo
Factible
Método diagnóstico de elección
Aislamiento del microorganismo
Identificación
Estudio de sensibilidad a los antimicrobianos
Facilita la aplicación de marcadores epidemiológicos
Características microscópicas
Características macroscópicas
Morfología
Hemólisis
Cultivo
Medios de cultivo y requisitos de crecimiento
Atmósfera
Temperatura
Nutrición
Pruebas bioquímicas
Utilizan la identificación preliminar y con lectura inmediata como la catalasa y oxidasa
Rápidas con lectura en menos de 6H como la hidrólisis de
Hipurato
la B-galactosidasa
Aminopeptidasas
Uresa
Indol
Lentas, con lectura de 18 a 48h, incluyen:
Oxido-fermentación
reducción de nitratos
Rojo de metilo
Agar hierro de Kligler
Fermentación de azucares
Hidrólisis de la esculina
Basadas en caracteres de resistencia a:
Optoquina
Bacitracina
Solubilidad en bilis
Crecimiento en caldo hipersalino
Métodos moléculares
Amplia variedad de genes
Utilizados como
Dianas moleculares en los estudios taxonómicos
Flogenia en las distintos géneros y distintas especies bacterianas
Como
ARNr 16S(rrs)
Polirirbonucleótido codificado por el gen rrs o ADN ribosomal 16S, incluida la subunidad 30S del ribosoma bacteriano
16S-23S ARNr
Espacio intergénico del 16S-23S ARNr (ITS) 4 . Estas ITS se presentan en un número variable en función del número de operones ARNr o alelos rrs
ARNr 23S
Puede ser una buena alternativa en los casos en los que la fracción 16S no proporciona resultados concluyentes
rpoB (subunidad B de la ARN polimerasa)
Es el gen codificante de la subunidad B de la ADN girasa o topoisomerasa II y está implicado en la replicación del ADN bacteriano.
Técnicas de identificación molecular en bacterias
Amplificación del genoma
Secuenciación de genes o fragmentos.
Desventajas
Calidad disminuida de las secuencias depositadas en la base de datos y errónea asignación de especies
Ausente o baja correlación entre la identificación genotípica y fenotípica
Baja resolución en la identificación mediante ARNr 16S
Presencia de electroferogramas o cromatogramas de ADN mixtos
Indicaciones en la identificación molecular
Serie de circunstancias en la identificación bacteriana
Dificultades de aislamiento
Crecimiento lento
Medios de cultivos in vitro complejos
Baja actividad de pruebas bioquímicas
Ausencia o baja efectividad de técnicas serológicas
Métodos basados en proteómica
Estudio y caracterización del conjunto de proteínas expresadas por un genoma (proteoma).
Técnicas de proteómica
Electroforesis
Espectrometría de masas
Técnica analítica que permite analizar con gran exactitud la composición de diferentes elementos químicos
3 componentes básicos
Fuente de Ionización
Analizador de masas
Detector
Espectrometría de masas MALDI-TOF en microbiología
Identificación de microorganismos
Importantes características
Para obtener iones de forma adecuada es necesario que la muestra esté embebida en una matriz orgánica
Como fuente de ionización emplea un láser.
La separación de los iones se produce según el "tiempo de vuelo"
El tiempo de obtención del espectro es aproximadamente de un minuto para 10 −12 g de un compuesto de masa/carga (m/z) de 1.000 daltons.
Ventajas
Alta tasa de identificación
Rapidez al obtener resultados fiables en un minuto
Facilidad en su preparación simple y uniforme, robusta y fiable
Gestión del paciente como administración de antibioticos,
Inconvenientes
Mantener el vacío del espectrómetro requiere trabajar y demora mucho tiempo del análisis
Requiere calibraciones y controles de calidad frecuentes
La matriz suspendida no es estable más de 15 días aprox. porque cristaliza en el vial
Limitaciones
La relación cantidad de microorganismo-microlitro de matriz va influir en la obtención de un buen resultado, conveniente estandarizar el inóculo
La identificación es independiente de que los medios de cultivo sean o no selectivos. Si es importante la antigüedad del cultivo
Existe un amplio número de referencias en las bases de datos comerciales empleadas para establecer la comparación e identificación de los microorganismos, pero sigue siendo limitado.