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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE ARBOVIROSES: ZIKA, CHIKUNGUNYA E FEBRE AMARELA…

- - - - Leucopenia com linfopenia menor que 1.000 cels/mm3
      - Trombocitopenia inferior a 100.000 cels/mm3
      - Aumento da velocidade de hemossedimentação
      - Aumento da proteína C-reativa
      - Elevação discreta das enzimas hepáticas
      - Elevação discreta da creatinina
      - Elevação discreta da creatinofosfoquinase (CPK)
- - - - Pesquisa de vírus - Isolamento viral por inoculação em células e camundongos recém-nascidos
      - Pesquisa de genoma do vírus Zika por transcrição reversa seguida por reação em cadeia da polimerase (RT-PCR).
    - - Pesquisa de anticorpos IgM/IgG por testes sorológicos
        
        Sorologia IgM reagente para Zika e reagente para dengue
        
        Infecção recente por dengue e/ou Zika, reação cruzada ou coinfecção
        
        Inconclusivo
        
        Sorologia IgM não reagente para Zika e não reagente para dengue
        
        Testagem para Chikungunya
        
        Sorologia IgM não reagente para Zika, dengue e chikungunya
        
        Descarta-se infecção recente por esses arbovírus e encerra a investigação
      - Teste de neutralização por redução de placas (PRNT)
      - Inibição da hemaglutinação (IH);
      - Estudo anatomopatológico seguido de pesquisa de antígenos virais por imuno-histoquímica (IHQ)
  - - - Hiperemia conjuntival/conjuntivite não purulenta
      - Artralgia/poliartralgia
      - Edema periarticular
      - Febre
    - - Esgotados os métodos diretos, uma nova amostra deve ser coletada a partir do 6º dia do início de sintomas, para realização de sorologia IgM
  - - - Confirmação por vínculo epidemiológico com um caso
        confirmado laboratorialmente
      - Gestantes, idosos, casos graves e óbitos
        
        Realização da 2ª sorologia e, para os resultados inconclusivos, a realização do PRNT
- - - - Pode ser realizado em camundongos ou por cultivo de células Vero ou C6/36. Técnica complexa, por isso pouco utilizada
      - Tipo de material: sangue/soro, LCR, urina, vísceras
      - Procedimento de coleta
        
        Sangue: coletar 3ml sem anticoagulante entre o 1° e 7° dia após início dos sintomas
        Urina: coletar 5 ml até o 15° dia após início dos sintomas
        
        Vísceras: coletar fragmentos pequenos (8-10g) do fígado, baço, pulmão e cérebro até 24h após óbito
    - - Tipo de material: Soro; LCR
      - Procedimento de coleta
        
        Coletar sangue sem anticoagulante a partir do 7° dia do início dos sintomas. Mínimo 3 ml de soro
      - Técnica de ELISA
        
        Método de captura de anticorpos IgM
        
        Reagente: possibilidade de reação cruzada e/ou inespecífica
        
        Avaliar vacinação recente contra febre amarela
        
        Avaliar possibilidade de infecções recentes por Flavivírus como dengue e Zika
        
        Teste de pesquisa de anticorpos da classe IgG
        
        Não indica infecção recente e ainda requer apoio dos dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais para conclusão do diagnóstico
      - Análise do resultado também com base nos dados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais
      - Teste de inibição da hemaglutinação
        
        Realizar em amostras do período de fase aguda e convalescente da doença, com intervalo de 14 a 21 dias entre a 1ª e a 2ª coleta
      - Teste de soro-neutralização
        
        Mede anticorpos neutralizantes contra o vírus da febre amarela e pode ser realizado em culturas de células e/ou em camundongos
    - - Realizada por RT-PCR
      - Tipo de material: soro, urina, vísceras (de humanos, primatas ou mosquitos)
      - Procedimento de coleta
        
        Sangue: coletar sem anticoagulante até o 10° dia após início dos sintomas, separando 3ml para o PCR. Urina: coletar 5ml até o 15° dia de início dos sintomas
    - - Tipo de material: vísceras
      - Deve vir acompanhada de exame histopatológico do fígado e de outros tecidos coletados
        
        Espera-se apresentação de lesões sugestivas de febre amarela
      - Procedimento de coleta
        
        Coletar fragmentos pequenos (2-3cm²) de cérebro, fígado, rins, baço, coração, pulmão, sinóvia, músculo esquelético e demais tecidos com alteração microscópica, até 48h após óbito
  - - - Isolamento do vírus da febre amarela
      - Detecção do genoma viral (e em algumas situações específicas essa condição deve vir acompanhada de outras)
      - Detecção de anticorpos IgM pela técnica de ELISA em indivíduos não vacinados, associados aos achados clínicos, epidemiológicos e laboratoriais
      - Aumento de 4 vezes ou mais dos títulos de anticorpos detectados na sorologia em amostras pareadas pela técnica de inibição da hemaglutinação
      - Achados histopatológicos que apresentem as lesões compatíveis com infecção recente por febre amarela, acompanhada da detecção de antígeno viral em técnica de imuno-histoquímica
      - Técnica laboratorial conclusiva em assintomático ou
        oligossintomático que, originário de busca ativa e não vacinado contra a febre amarela, apresentou resultado positivo
  - - - Bilirrubina
        
        Bilirrubina direta (BD): valores de referência no adulto de 0,1 a 0,3mg/100mL de sangue.
        
        Bilirrubina total (BT): valores de referência no adulto de 0,3 a 1,2mg/100mL de sangue
        
        Elevação dos níveis de bilirrubina com predomínio do aumento da bilirrubina direta sugere lesão intensa dos hepatócitos, com evidência importante de icterícia em mucosas e pele
      - Aminotransferases
        
        Aspartato aminotransferase (AST/TGO)
        
        Valor de referência no adulto: até 40U/L
        
        Valores >1.000U/L são indicativos de doença associada com lesão extensa do tecido hepático, como normalmente ocorre nos casos graves de febre amarela
        
        Alanina aminotransferase (ALT/TGP)
        
        Valor de referência no adulto: até 30U/L
    - - Níveis normais da creatinina no adulto: 0,6-1,3mg/dL. Ureia: 10-45mg/dL
        
        As variáveis sexo, idade e peso do paciente devem ser consideradas na interpretação desses resultados
      - Avaliam função renal
  - - - Materiais: vísceras
        
        Coletar fragmentos pequenos (0,5cm x 2cm) de fígado, rim, coração, baço, pulmão, linfonodos, cérebro.
        
        Idealmente antes de 8h após óbito, ou no máximo após 24h
    - - Materiais: Sangue/soro; vísceras
        
        Sangue: coletar 2 a 6 ml sem anticoagulante em animais vivos de até 3kg. Acima de 6kg: 6 a 10ml. Animais mortos: 6 a 10ml por punção cardíaca
        
        Vísceras: coletar fragmentos pequenos (0,5-2cm) do fígado, rim coração, baço, pulmão, linfonodos, cérebro. Idealmente antes das 8h após óbito, ou até 24h
- - - - Confirma diagnóstico
    - - Descarta infecção recente por chikungunya e direciona o diagnóstico para confirmação de infecção recente por dengue e Zika (IgM)
    - - Descarta infecção recente por dengue e Zika e direciona o diagnóstico para confirmação de infecção por chikungunya (IgM) em uma 2ª amostra
        
        Sorologia IgM reagente para chikungunya na 2a amostra
        
        Confirma infecção recente por chikungunya e encerra investigação laboratorial
        
        Sorologia IgM não reagente para chikungunya na 2a amostra
        
        Descarta a infecção por CHIKV
    - - Indica exposição prévia com CHIKV
    - - Reagente, confirma-se infecção tardia por CHIKV
      - Não reagente, descarta-se infecção tardia por CHIKV