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Métodos para medir el crecimiento microbiano, Katya Sofia Garcia Diaz -…
Métodos para medir el crecimiento microbiano
Determinación del número de células
Recuento microscopio directo
Por medio de cámaras de recuento especiales (Neubauer, Petroff-Hausser).
La suspensión microbiana se coloca en la cavidad cuadriculada de dimensiones conocidas y se tapa
con el cubre objeto
Como se conoce el área de las cuadrículas y la altura de la cámara de recuento, el
volumen ocupado por la suspensión en cada cuadrícula queda determinado.
Para obtener el número de microorganismos por mL de suspensión, re requiere contra el número de organismos en varias cuadrículas
Calcular la cifra media de recuento por cuadrícula y multiplicar por el factor de conversión correspondiente.
Recuento en placa
Se basa en la capacidad de una célula viable de formar una colonia en un medio de cultivo adecuado
Standard (PCA).
Por lo tanto se cuentan colonias, cada una proviene de una sola célula viable.
(Célula viable: capaz de dividirse y formar células hijas.)
2 métodos
Extensión en placa
0,1 ml de la suspensión celular se extiende sobre la
superficie de la placa usando una espátula de Drigalski. La placa se incuba y se cuentan las colonias
Vertido en placa
1 ml de la suspensión en la placa y se agrega el agar
fundido a 45 ºC
NMP
Se efectúan diluciones decimales de la población inicial, las que se incuban a temperatura adecuada en
tubos conteniendo medios de cultivos líquidos standards
Los tubos que contengan células se observará desarrollo y se pondrán turbios
La proporción de tubos inoculados que muestran crecimiento es una medida de probabilidad, se
utilizan tablas estadísticas.
Medida de la masa celular
Determinación del peso seco
A partir de una suspensión celular, se separan las células por centrifugación, se lavan y secan en
estufa hasta peso constante
Medida de la turbidez de una suspensión celular
Es un método óptico y representa la técnica más rápida para medir la masa celular de los
microorganismos unicelulares.
Esta técnica se basa en el hecho de que pequeñas partículas difractan (o dispersan) la luz incidente en
forma proporcional a su concentración (dentro de ciertos límites)
La intensidad de luz transmitida es por lo tanto inversamente proporcional al número de células presentes y se mide habitualmente con un espectrofotómetro que mide en unidades de absorbancia
Determinación de las concentración celular por valoración del contenido de Nitrógeno
Entre los principales constituyentes del material celular se encuentran las proteínas y como el nitrógeno es un componente fundamental de estas, puede estimarse la población de células en función del contenido de nitrógeno en las células.
El contenido de nitrógeno en la célula es del 12 % en peso seco.
Para esta determinación, hay que recoger las células, lavarlas para eliminar el medio y realizar un
análisis químico cuantitativo de nitrógeno.
Katya Sofia Garcia Diaz